【摘 要】
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目的:探讨M1型巨噬细胞源外泌体对卵泡膜细胞活力的影响及其作用机制.方法:采用脂多糖(LPS)处理Raw264. 7小鼠巨噬细胞,构建M1型巨噬细胞模型及巨噬细胞-卵泡膜细胞共培养体
【机 构】
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中山大学附属第六医院生殖医学研究中心,广东广州,510655中山大学附属第一医院男科,广东广州,510080;
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目的:探讨M1型巨噬细胞源外泌体对卵泡膜细胞活力的影响及其作用机制.方法:采用脂多糖(LPS)处理Raw264. 7小鼠巨噬细胞,构建M1型巨噬细胞模型及巨噬细胞-卵泡膜细胞共培养体系.超速离心法分离巨噬细胞分泌的外泌体;通过电镜、Western blot和纳米流式检测仪鉴定外泌体.体外分离培养小鼠卵泡膜细胞,与PKH67荧光标记的外泌体共孵育,观察卵泡膜细胞摄取外泌体的情况.CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术分析细胞周期分布,qPCR及Western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1B(CDKN1B)的表达.结果:在巨噬细胞-卵泡膜细胞共培养体系中,LPS诱导的M1型巨噬细胞通过外泌体增强卵泡膜细胞活力.电镜、Western blot及纳米流式检测结果显示,巨噬细胞源外泌体被成功分离.PKH67标记的外泌体与卵泡膜细胞共孵育实验证实卵泡膜细胞能摄取大量巨噬细胞源外泌体.这些外泌体可增强卵泡膜细胞的活力,使卵泡膜细胞G0/G1期比例下降,S期比例升高,且卵泡膜细胞CDKN1B的mRNA及蛋白相对表达量均明显低于对照组.结论:卵泡膜细胞能摄取巨噬细胞分泌的外泌体.M1型巨噬细胞源外泌体通过抑制CDKN1B的表达而增强卵泡膜细胞的活力.
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