探讨应用振荡法分离小鼠视网膜色素上皮（RPE）细胞并进行总RNA提取的效果。
方法实验研究。应用机械法对4只小鼠眼制作眼杯，去除视网膜后应用RNA保护试剂及振荡的方法对小鼠RPE进行分离，将应用振荡法分离后的眼杯铺片，采用免疫细胞化学方法检测分离后RPE细胞残留情况；收集分离的细胞，提取总RNA。同时分别应用自发分离法、酶法、眼杯法各对4只小鼠眼RPE进行分离，提取总RNA，比较不同方法提取的RPE细胞总RNA量，并应用实时定量PCR方法对RPE细胞中RPE65、vWF及COL6A1 mRNA表达水平进行比较。数据采用单因素方差分析、独立样本t检验进行比较。
结果采用4种方法进行RPE分离得到的总RNA量差异有统计学意义（F=8.538，P<0.01），免疫细胞化学方法证实应用振荡法可以使RPE细胞与脉络膜完全分离，得到的总RNA量为（234.47±49.13）ng，与自发分离法及酶法比较差异无统计学意义（P>0.05），但低于眼杯法（P<0.05）。4种方法得到的RPE65的mRNA表达量差异有统计学意义（F=38.453，P<0.01），通过实时定量PCR法检测振荡法RPE65的mRNA表达量与自发分离法相当（P>0.05），低于酶法（P<0.01），但要高于眼杯法（P<0.01）。体现脉络膜细胞污染程度的标志物vWF及COL6A1 mRNA相对表达量，4种方法差异有统计学意义（F=45.432、90.498，P<0.01）。振荡法vWF mRNA表达水平低于自发分离法（P<0.05），与酶法相似（P>0.05），远低于眼杯法（P<0.01）；COL6A1mRNA表达水平与自发分离法及酶法相似（P>0.05），远低于眼杯法（P<0.01）。
结论应用振荡法可有效分离小鼠RPE细胞，并最大限度地降低来自脉络膜的污染，经总RNA提取后可得到较多的总RNA量及较好的质量，此方法方便快捷、稳定性较好，适合小样本量的RPE细胞的基因转录水平分析。