【摘 要】
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目的：利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠肝炎病毒N基因。
方法：根据GenBank发表的小鼠肝炎病毒A59株N基因序列(AY700211),设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增出N
【机 构】
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上海实验动物研究中心,上海201203上海市实验动物质量监督检验站,上海201203东华大学化学化工与生物工程学院,上海200032苏州大学医学部,苏州215123
【出 处】
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华东地区第十一届实验动物科学学术交流会暨实验动物规范化、标准化研讨会
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目的：利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠肝炎病毒N基因。
方法：根据GenBank发表的小鼠肝炎病毒A59株N基因序列(AY700211),设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增出N基因的ORF,将目的片段克隆入pFastBacHTa中,构建重组转移载体pFastBHa-N。将重组质粒转化DH10Bac感受态细菌,与Bacmid发生位点特异性转座作用,获得重组穿梭载体Bacmid-N。通过脂质体将其转染昆虫细胞sf9。
结果：获得了重组杆状病毒rBN,并通过Westem blot和IFA分析表明证实N蛋白在昆虫细胞中获得正确表达,且表达产物具有抗原性。
结论：本研究利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功表达了小鼠肝炎病毒N蛋白,为进一步进行建立诊断学方法的研究奠定了基础。
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