探讨N-芐基-2-(嘧啶-4-基氨基)(Thiazovivin)对人角膜内皮细胞(HCEC)形态和功能的影响。
方法实验研究。培养原代HCEC，采用光镜观察细胞形态及神经元特异性烯醇化酶(NSE)的免疫荧光实验进行鉴定。以N-钙黏着蛋白(N-cadherin)和钠钾泵(Na+/K+-ATPase)为指标，通过免疫荧光实验考察添加不同浓度(0、2、4、6 μmol/L)Thiazovivin作用不同时间(24及48 h)对原代HCEC形态和离子泵功能的影响，以期筛选出改善HCEC形态和离子泵功能效果最佳的Thiazovivin的浓度及作用时间。最后通过免疫荧光实验和免疫印迹实验考察Thiazovivin对Rho相关激酶(ROCK)表达的影响。
结果培养的原代HCEC的NSE染色均匀，荧光强度明显，细胞呈六边形紧密排列。原代HCEC在0、2、4、6 μmol/L的Thiazovivin分别作用24 h后，Na+/K+-ATPase抗体染色后的平均吸光度(A)值分别为1.27±0.08、3.72±0.17、21.07±4.67、3.69±0.34, 4 μmol/L的Thiazovivin的Na+/K+-ATPase免疫荧光表达最强，其A值最大；通过N-cadherin免疫荧光染色，发现HCEC在4 μmol/L Thiazovivin作用24 h后，细胞轮廓清晰，细胞结构完整。而4 μmol/L的Thiazovivin作用时间延长至48 h，通过N-cadherin和Na+/K+-ATPase免疫荧光染色，发现与其作用24 h相比，荧光强度无明显变化，但细胞排列比24 h时略整齐。此外，Thiazovivin能减弱ROCK免疫荧光染色的荧光强度及下调ROCK蛋白表达。
结论Thiazovivin对原代HCEC的形态、连接和离子泵功能具有保护作用，4 μmol/L Thiazovivin作用24 h对细胞形态、连接及离子泵功能的改善效果最佳，且Thiazovivin可显著抑制ROCK蛋白表达。(中华眼科杂志，2016，52：686-692)