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【摘 要】水环境中微生物贾第鞭毛虫和隐孢子虫是两种严重危害水质安全的致病性原生寄生虫，主要通过水和食物等传播疾病，人和动物感染“两虫”所患疾病分别称为贾第鞭毛虫病和隐孢子虫病。当前，人们逐渐认识到其对人类的危害不容忽视。因此研究适合我国广大供水企业采用可靠的“两虫”检测方法极其重要，对保障我国城市供水水质安全具有重要的意义。现就“两虫”在水环境中的检测方法予以综述。
【关键词】隐孢子虫；贾第鞭毛虫；检测
一、隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测的改进方法
传统方法在使用过程中逐渐暴露出检出率低、重现率差、过程复杂、成本昂贵等缺陷，笔者通过工作实践开始在各个步骤予以改进，摸索出各种优化方案。
（一）样品前处理优化
对传统方法中的样品处理过程进行改进，方案如下：采样一膜过滤一刮擦一隔夜浸泡一漩涡振荡一2次摇床洗脱一离心浓缩一洗涤沉淀一再次离心浓缩一IMS（2次酸解离）一IFA镜检读数。该方法改进之处如下：
1.直接在洗脱基础上，增加了滤膜刮擦后隔夜浸泡和洗脱前剧烈振荡，提高回收率，且使回收率更稳定；
2.更换洗脱液，投加高岭土浊液，提高水样浊度至4NTU；
3.离心浓缩后洗涤沉淀2次酸解离。
通过以上改进步骤，缩短了反应混合时间，减少了两虫与磁珠结合体解离，最大限度保留两虫在终检物中的存在水平，使检测结果尽可能接近实际。
（二）方法联用
传统方法重现率差，关键限制步骤在漂浮处理，沉淀分离法重现率高于蔗糖漂浮分离法。通过沉降法与免疫磁分离法联用，改进浓缩步骤，提高了重现率。沉降法与免疫磁分离法联用重现率可达38.9%～58.5%，高于蔗糖漂浮法（重现率为1.3%～5.4%）。且卵囊（包囊）预先染色允许精确估计峰浓度等于或低于背景水平的重现率，重现率在一定范围的生物固体中稳定，不受贮存保留时间的影响。
（三）改进检测设备及检测步骤
目前，已知的1622和1623方法检测系统主要有：a.Cartridge方法、 b.Envirochek浓缩法、c.Filta-Max系统。我国生活饮用水标准检验方法微生物指标中采用的是Envirochek浓缩分析方法和Filta—Max分析方法。 Filta-max系统研发公司正在改进Flita-max的清洗程序和清洗台及颗粒浓缩设备的替代处理器。此系统产生的数据信息符合1622和1623标准，用Stom-acher离心技术代替Filta-max洗提、浓缩可得到平行结果，避免清洁Filta-max清洗台及流出装置，这对处理样本量大，寻求提高生产效率的实验室而言很有意义。Stom-acher技术主要改进之处如下：
1.卵囊捕获和流出增加；
2.结合IMS，特异性微生物浓缩，降低假阳性和非特异性干扰；
3.新增的染色步骤进一步有助于鉴定卵囊或包囊；
Envirochek方法中过滤系统可采用标准滤囊和高容量滤囊，高容量滤器是自然水检测较好的选择，过滤能力受温度变化的影响相对小。使用Envirochek过滤器进行的检测中，卵囊回收率高于ICRSS（信息收集法则补充调查），两种方法分别为54%和43%，而包囊回收率低于ICRSS，两种方法分别为25%和53%。原因可能是使用的包囊原初始状态存在问题（质量不好，在采集和处理过程中解体），也可能是所用的包囊株不同。浊度可解释孢囊回收率在不同点的差别，但不能解释卵囊回收率的差别。将Filta—Max xpress快速法的检测性能与EPA标准检测方法1623中的两种方法（即IDEXX的 Filta—Max系统和PaII Gelman的EnvirochekTM HV 浓缩器）对不同环境水样加标样品的回收率和精密度进行比较，结果显示，Filta—Max xpress快速法对两虫的回收率符合EPA样品检测标准，检测性能等同于目前认可的标准方法。该方法具有检测速度快，可显著提高样品处理量，同时减少劳动量。
二、隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测的可替代方法
实验表明，浊度的高低与隐孢子虫卵囊的去除效果之间存在显著的相关性，可以作为指示混凝和过滤是否处于最佳状态的指标，同时也可用其估计出厂水中的卵囊含量。实测结果表明，如果出厂水浊度≤0.1NTU，则可大大降低水中传播疾病的几率。USEPA为了控制隐孢子虫，要求对浊度进行连续检测，结果发现，出厂浊度在0.3NTU～0.5 NTU时并不能有效保证病原微生物的去除效果，但出水浊度下降到0.2Nrru时则出水的微生物安全性显著上升。然而，浊度作为病原性原生物的替代指标是不完全可靠的，因为浊度值不仅与颗粒的浓度、大小、形状、表面特性、光线特性等因素有关，同时还受浊度仪的设计参数、操作人员、工作环境、维护检修等方面的影响。浊度仪是用来测量水的相对澄清程度，它不直接反映颗粒物的物理参数。大多数浊度仪是用钨灯照射相对大量的水样。然后用光电二极管在一定角度上测定来自颗粒物“云”的散射，用颗粒物“云”的亮度作为仪器的电输出信号。其测量结果受颗粒物对光的散射能力的影响，深色颗粒物如碳粒或对光的散射能力低的颗粒物如生物颗粒（藻类），会导致光信号减弱。使测量结果偏低；如果测量体系中存在大量的超细颗粒物，因其比大的颗粒物对光的散射更有效，导致光信号被夸大，使测量结果偏高。受设计原理的限制，严格意义上讲，浊度仪连续检测所测值不能完全代表瞬时值，而且滞后。实验表明，浊度主要反映粒径小于1um的颗粒含量，但对粒径大于lum的颗粒，检测精度就显著下降。而“两虫”的个体尺寸都明显大于1um，通常在2un一14um之间，对浊度的贡献率很小。因此，即使在浊度很低的水中仍然有可能存在较高浓度的“两虫”，并且较大的絮凝体颗粒也可能包裹或附着有卵囊和孢囊。
二是颗粒计数。颗粒计数仪测量原理与浊度仪完全不同，它使用更精确的发光二极管光源，形成一束非常狭小又非常明亮的激光，它与被测液体流体垂宣，入射光束由于被液体中的粒子阻挡而减弱。与浊度仪相比，颗粒计数仪对粒径大于1um的悬浮颗粒具有更高的检测灵敏度。从0.1um直至几千um范围内的颗粒物质都可得到有效检测，更加符合实际水质状况。实验表明，虽然浊度和颗粒计数与隐孢子虫去除率间的关系均不稳定，但相比之下，颗粒计数的相关性更好，更适于作为隐孢子虫去除效果的实时检测工具。经模型试验和生产实验得证：粒径大于2un。颗粒浓度小于50/mL时，可以保证“两虫”的危害性极低。在0.1um附近，浊度计的敏感性和线性极差，这种问题不是浊度仪的质量问题造成的，是浊度的定义本身造成的，而颗粒物计数仪在50/mL浓度时的精度非常好。对粒径为3 um一 5um，5um一8um，8um一10um的颗粒进行计数的结果与水样中隐孢子虫卵囊的密度呈现出良好的相关性，这进一步证明颗粒计数结果作为“两虫”密度替代指标的有效性。
三、结语
总之，水处理系统中的“两虫”给城市水环境带来生态风险，无论人们是否意识到“两虫”危害的严重性，其对人类及动物的危害将日渐暴露。检验部门应尽快找出灵敏度高、成本低、耗时短、易操作的“两虫”检验方法，或其替代检测指标，以迅速、有效、准确地检出水中两虫水平，及时处理存在“两虫”隐患的生活饮用水。
参考文献：
[1]孙晓智，吴绍强.食源性寄生虫病的危害及检测研究现状[J].中国畜牧兽医，2007，34.
[2]单吴，戈建军，吴海玮.人隐孢子虫的研究进展[J].中国病原生物学杂志，2007，2.
【关键词】隐孢子虫；贾第鞭毛虫；检测
一、隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测的改进方法
传统方法在使用过程中逐渐暴露出检出率低、重现率差、过程复杂、成本昂贵等缺陷，笔者通过工作实践开始在各个步骤予以改进，摸索出各种优化方案。
（一）样品前处理优化
对传统方法中的样品处理过程进行改进，方案如下：采样一膜过滤一刮擦一隔夜浸泡一漩涡振荡一2次摇床洗脱一离心浓缩一洗涤沉淀一再次离心浓缩一IMS（2次酸解离）一IFA镜检读数。该方法改进之处如下：
1.直接在洗脱基础上，增加了滤膜刮擦后隔夜浸泡和洗脱前剧烈振荡，提高回收率，且使回收率更稳定；
2.更换洗脱液，投加高岭土浊液，提高水样浊度至4NTU；
3.离心浓缩后洗涤沉淀2次酸解离。
通过以上改进步骤，缩短了反应混合时间，减少了两虫与磁珠结合体解离，最大限度保留两虫在终检物中的存在水平，使检测结果尽可能接近实际。
（二）方法联用
传统方法重现率差，关键限制步骤在漂浮处理，沉淀分离法重现率高于蔗糖漂浮分离法。通过沉降法与免疫磁分离法联用，改进浓缩步骤，提高了重现率。沉降法与免疫磁分离法联用重现率可达38.9%～58.5%，高于蔗糖漂浮法（重现率为1.3%～5.4%）。且卵囊（包囊）预先染色允许精确估计峰浓度等于或低于背景水平的重现率，重现率在一定范围的生物固体中稳定，不受贮存保留时间的影响。
（三）改进检测设备及检测步骤
目前，已知的1622和1623方法检测系统主要有：a.Cartridge方法、 b.Envirochek浓缩法、c.Filta-Max系统。我国生活饮用水标准检验方法微生物指标中采用的是Envirochek浓缩分析方法和Filta—Max分析方法。 Filta-max系统研发公司正在改进Flita-max的清洗程序和清洗台及颗粒浓缩设备的替代处理器。此系统产生的数据信息符合1622和1623标准，用Stom-acher离心技术代替Filta-max洗提、浓缩可得到平行结果，避免清洁Filta-max清洗台及流出装置，这对处理样本量大，寻求提高生产效率的实验室而言很有意义。Stom-acher技术主要改进之处如下：
1.卵囊捕获和流出增加；
2.结合IMS，特异性微生物浓缩，降低假阳性和非特异性干扰；
3.新增的染色步骤进一步有助于鉴定卵囊或包囊；
Envirochek方法中过滤系统可采用标准滤囊和高容量滤囊，高容量滤器是自然水检测较好的选择，过滤能力受温度变化的影响相对小。使用Envirochek过滤器进行的检测中，卵囊回收率高于ICRSS（信息收集法则补充调查），两种方法分别为54%和43%，而包囊回收率低于ICRSS，两种方法分别为25%和53%。原因可能是使用的包囊原初始状态存在问题（质量不好，在采集和处理过程中解体），也可能是所用的包囊株不同。浊度可解释孢囊回收率在不同点的差别，但不能解释卵囊回收率的差别。将Filta—Max xpress快速法的检测性能与EPA标准检测方法1623中的两种方法（即IDEXX的 Filta—Max系统和PaII Gelman的EnvirochekTM HV 浓缩器）对不同环境水样加标样品的回收率和精密度进行比较，结果显示，Filta—Max xpress快速法对两虫的回收率符合EPA样品检测标准，检测性能等同于目前认可的标准方法。该方法具有检测速度快，可显著提高样品处理量，同时减少劳动量。
二、隐孢子虫和贾第鞭毛虫检测的可替代方法
实验表明，浊度的高低与隐孢子虫卵囊的去除效果之间存在显著的相关性，可以作为指示混凝和过滤是否处于最佳状态的指标，同时也可用其估计出厂水中的卵囊含量。实测结果表明，如果出厂水浊度≤0.1NTU，则可大大降低水中传播疾病的几率。USEPA为了控制隐孢子虫，要求对浊度进行连续检测，结果发现，出厂浊度在0.3NTU～0.5 NTU时并不能有效保证病原微生物的去除效果，但出水浊度下降到0.2Nrru时则出水的微生物安全性显著上升。然而，浊度作为病原性原生物的替代指标是不完全可靠的，因为浊度值不仅与颗粒的浓度、大小、形状、表面特性、光线特性等因素有关，同时还受浊度仪的设计参数、操作人员、工作环境、维护检修等方面的影响。浊度仪是用来测量水的相对澄清程度，它不直接反映颗粒物的物理参数。大多数浊度仪是用钨灯照射相对大量的水样。然后用光电二极管在一定角度上测定来自颗粒物“云”的散射，用颗粒物“云”的亮度作为仪器的电输出信号。其测量结果受颗粒物对光的散射能力的影响，深色颗粒物如碳粒或对光的散射能力低的颗粒物如生物颗粒（藻类），会导致光信号减弱。使测量结果偏低；如果测量体系中存在大量的超细颗粒物，因其比大的颗粒物对光的散射更有效，导致光信号被夸大，使测量结果偏高。受设计原理的限制，严格意义上讲，浊度仪连续检测所测值不能完全代表瞬时值，而且滞后。实验表明，浊度主要反映粒径小于1um的颗粒含量，但对粒径大于lum的颗粒，检测精度就显著下降。而“两虫”的个体尺寸都明显大于1um，通常在2un一14um之间，对浊度的贡献率很小。因此，即使在浊度很低的水中仍然有可能存在较高浓度的“两虫”，并且较大的絮凝体颗粒也可能包裹或附着有卵囊和孢囊。
二是颗粒计数。颗粒计数仪测量原理与浊度仪完全不同，它使用更精确的发光二极管光源，形成一束非常狭小又非常明亮的激光，它与被测液体流体垂宣，入射光束由于被液体中的粒子阻挡而减弱。与浊度仪相比，颗粒计数仪对粒径大于1um的悬浮颗粒具有更高的检测灵敏度。从0.1um直至几千um范围内的颗粒物质都可得到有效检测，更加符合实际水质状况。实验表明，虽然浊度和颗粒计数与隐孢子虫去除率间的关系均不稳定，但相比之下，颗粒计数的相关性更好，更适于作为隐孢子虫去除效果的实时检测工具。经模型试验和生产实验得证：粒径大于2un。颗粒浓度小于50/mL时，可以保证“两虫”的危害性极低。在0.1um附近，浊度计的敏感性和线性极差，这种问题不是浊度仪的质量问题造成的，是浊度的定义本身造成的，而颗粒物计数仪在50/mL浓度时的精度非常好。对粒径为3 um一 5um，5um一8um，8um一10um的颗粒进行计数的结果与水样中隐孢子虫卵囊的密度呈现出良好的相关性，这进一步证明颗粒计数结果作为“两虫”密度替代指标的有效性。
三、结语
总之，水处理系统中的“两虫”给城市水环境带来生态风险，无论人们是否意识到“两虫”危害的严重性，其对人类及动物的危害将日渐暴露。检验部门应尽快找出灵敏度高、成本低、耗时短、易操作的“两虫”检验方法，或其替代检测指标，以迅速、有效、准确地检出水中两虫水平，及时处理存在“两虫”隐患的生活饮用水。
参考文献：
[1]孙晓智，吴绍强.食源性寄生虫病的危害及检测研究现状[J].中国畜牧兽医，2007，34.
[2]单吴，戈建军，吴海玮.人隐孢子虫的研究进展[J].中国病原生物学杂志，2007，2.