【摘 要】
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目的 探讨改变退火温度对甲基特异性聚合酶链反应PCR检验指标有效性的影响.方法 将经测序证实的RASSF1A甲基化标本分别作为完全甲基化(100%M)和完全未甲基化的标本(0%M),按1
【机 构】
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同济大学附属第十人民医院检验科,上海,200072兰州大学第二附属医院泌尿外科,甘肃,兰州,730000;
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目的 探讨改变退火温度对甲基特异性聚合酶链反应PCR检验指标有效性的影响.方法 将经测序证实的RASSF1A甲基化标本分别作为完全甲基化(100%M)和完全未甲基化的标本(0%M),按1∶3体积比例混合,作梯度PCR扩增,摸索适当的退火温度.选取单一电泳条带的温度为优化的退火温度,并以这些温度检测70例标本[35对,以同一患者的肿瘤组织(K)、癌旁组织(N)为1对],比较其在各温度情况时的扩增效果.结果 以上指标依年龄(70岁以上/70岁以下)不同出现不同的变化趋热;似然比分析数值均介于0.1～10之间;70岁以下组阳性预测值大多＞70岁以上组;若定义64℃以上温度为高温段,63.3℃以下温度为低温段,则低温段70岁以下组阴性预测值＞70岁以上组,高温段70岁以上组＞70岁以下组.结论 与普通PCR类似,甲基特异性PCR可以通过调整退火温度来改变其检测效能,但温度变化间隔最好不要＜1℃;应用甲基特异性PCR检测RASSF1A甲基化可以作为膀胱肿瘤早期诊断的辅助方法,在较低年龄组的应用价值高于高年龄组,尤其是在排除肿瘤方面.
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