【摘 要】
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目的探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对单核巨噬细胞THP-1源性巨噬细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)介导的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)摄取的影响及机制。方法用丙二醇甲醚醋酸酯孵育THP-1单核细胞48 h诱导分化成巨噬细胞,人重组PCSK9蛋白预处理巨噬细胞1 h后,与ox-LDL孵育24 h诱导为泡沫细胞,油红O染色观察对照组(泡沫细胞)与不同浓度人重组PCSK9
【机 构】
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目的探讨前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)对单核巨噬细胞THP-1源性巨噬细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)介导的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)摄取的影响及机制。
方法用丙二醇甲醚醋酸酯孵育THP-1单核细胞48 h诱导分化成巨噬细胞,人重组PCSK9蛋白预处理巨噬细胞1 h后,与ox-LDL孵育24 h诱导为泡沫细胞,油红O染色观察对照组(泡沫细胞)与不同浓度人重组PCSK9蛋白孵育组细胞内脂质蓄积情况,酶法测定细胞内胆固醇含量,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)与Western blot法检测LOX-1 mRNA和蛋白表达。荧光显微镜观察对照组(巨噬细胞)、PCSK9蛋白单独孵育组和PCSK9蛋白与抗LOX-1抗体、IgG抗体共孵育组对Dil标记氧化低密度脂蛋白(Dil-ox-LDL)的摄取情况。检测对照组(泡沫细胞)与PCSK9蛋白组对Toll样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)、环氧合酶-2(COX-2)mRNA和蛋白表达影响,以及PCSK9蛋白与TLR4抑制剂(TAK-242)共同孵育组NF-κB mRNA和蛋白表达影响,与NF-κB抑制剂(PDTC)共同孵育组COX-2 mRNA和蛋白表达影响,与COX-2抑制剂(NS-398)或还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶抑制剂(DPI)共同孵育组活性氧簇(ROS)生成的影响。检测对照组(PCSK9蛋白预处理泡沫细胞)和PCSK9蛋白分别与TAK-242、PDTC、NS-398、DPI共同孵育组LOX-1 mRNA和蛋白表达。
结果(1)PCSK9组细胞内脂滴综合光密度、总胆固醇、胆固醇酯和胆固醇酯/总胆固醇比值均高于对照组(P均<0.05),PCSK9组LOX-1 mRNA和蛋白表达均高于对照组(P均<0.05)。(2)PCSK9组与PCSK9+IgG抗体组巨噬细胞Dil-ox-LDL荧光强度高于对照组(P均<0.05),PCSK9+抗LOX-1抗体组荧光强度低于PCSK9组与PCSK9+IgG抗体组(P均<0.05)。(3)PCSK9组TLR4、NF-κB、COX-2 mRNA和蛋白表达均高于相应对照组(P均<0.05),PCSK9+TAK-242组TLR4、NF-κB与PCSK9+PDTC组NF-κB、COX-2 mRNA和蛋白表达均低于相应PCSK9组(P均<0.05)。PCSK9组ROS水平高于对照组(P<0.05),PCSK9+NS-398和PCSK9+DPI组ROS水平均低于PCSK9组(P均<0.05)。(4)TAK-242、PDTC、NS-398、DPI分别与PCSK9蛋白共孵育组的LOX-1 mRNA和蛋白表达均低于PCSK9蛋白单独孵育组(P均<0.05)。
结论PCSK9可能通过THP-1源性巨噬细胞TLR4/NF-κB/COX-2/ROS途径调节LOX-1介导的ox-LDL摄取。
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