论文部分内容阅读
目的 miR-375在食管鳞状细胞癌(简称鳞癌)中低表达,但其调控的下游靶基因仍不明确。文中初步探讨miR-375在调控人食管鳞癌细胞中人矮小同源盒基因2(short stature homobox 2,SHOX2)的表达中的作用。方法运用生物信息学预测软件Target Scan、miRanda、Pic Tar、miRTarget2和PITA预测miR-375在SHOX2基因可能的作用位点。构建野生型SHOX2 3’UTR报告基因载体(p SHOX2-375-WT)及突变型SHOX2 3’UTR报告基因载体(p SHOX2-375-mut),测序鉴定。分7组转染:pmiR组、p SHOX2-375-WT组、p SHOX2-375-WT+miR-375组、p SHOX2-375-WT+miR-NC组、p SHOX2-375-mut组、p SHOX2-375-mut+miR-375组、p SHOX2-375-mut+miR-NC组,分别检测荧光素酶活性。转染miR-375的mimics于食管鳞癌细胞中,SHOX2 mRNA及蛋白表达分析。另检测食管鳞癌组织术后标本miR-375及SHOX2表达。结果 Target Scan、miRanda、Pic Tar、Mir Target2和PITA软件预测结果显示miR-375在SHOX2 3’UTR 1156-1170bp区域有且仅有1个保守作用位点。p SHOX2-375-WT+miR-375组荧光素酶活性(0.261±0.036)显著低于[pmiR(1.818±0.061)、p SHOX2-375-WT组(1.820±0.086)、p SHOX2-375-WT+miR-NC组(1.851±0.094)、p SHOX2-375-mut组(1.861±0.059)、p SHOX2-375-mut+miR-375组(1.896±0.048)、p SHOX2-375-mut+miR-NC组(1.760±0.062)],差异均有统计学意义(P<0.01)。过表达miR-375后EC9706细胞SHOX2 mRNA及蛋白较对照组相比表达受到抑制。食管鳞癌组织中的miR-375较癌旁组织表达降低,而SHOX2表达较癌旁组织表达增强。结论 miR-375在食管鳞癌细胞EC9706中靶向调控SHOX2基因的表达。