银染mRNA差异显示方法的建立

来源 :福建医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：eidolonfish

【摘要】

：

目的建立银染mRNA差异显示方法,为差异表达基因片断的分离克隆奠定基础. 方法采用随机引物和锚定引物各1条,建立差异显示反转录聚合酶链式反应(DDRT-PCR)和银染方法,对DDRT-P

【作者】

：

陈晓梨陈鑫基郑静张昭秀胡建达

【机构】

：

福建医科大学

【出处】

：

福建医科大学学报

【发表日期】

：

2002年3期

【关键词】

：

银染mRNA差异显示方法基因扩增差异表达基因克隆 DDRT-PCR reverse transcription polymerase chain reac

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目的建立银染mRNA差异显示方法,为差异表达基因片断的分离克隆奠定基础. 方法采用随机引物和锚定引物各1条,建立差异显示反转录聚合酶链式反应(DDRT-PCR)和银染方法,对DDRT-PCR过程中各实验影响因素进行优化,割取差异条带进行二次扩增. 结果当总RNA用量为0.2 μg,引物浓度为0.6～1.0 μmol/L,dNTP浓度为200 μmol/L,MgCl2浓度为1.6～2.0 mmol/L时,同时起始5个循环的退火温度为50 ℃,扩增效率最佳,特异性好,背景干净. 结论 DDRT-PCR方法简便

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