【摘 要】
：
泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway)是具有高度选择性的蛋白质降解途径,该途径对细胞内蛋白的选择性降解起着重要作用.本研究根据GenBank已登录的真核生物泛素
【机 构】
：
华南农业大学资源环境学院昆虫学系/教育部生物防治工程中心,中山大学昆虫学研究所/有害生物控制与资源利用国家重点实验室
论文部分内容阅读
泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway)是具有高度选择性的蛋白质降解途径,该途径对细胞内蛋白的选择性降解起着重要作用.本研究根据GenBank已登录的真核生物泛素(ubiquitin)编码框的氨基酸序列,设计一对简并引物,RT-PCR克隆了家蝇Musca domestica泛素基因的编码区cDNA序列,并进行了测序.序列分析表明,该编码区的长度为228 bp,编码76个氨基酸,命名为Mdubi,GenBank登录号为DQ115796.同源性比较发现,Mdubi氨基酸序列与其他真核生物泛素编码框同源性可达94%以上.RT-PCR检测表明,Mdubi在家蝇不同组织中均高效表达,且不受大肠杆菌Escherichia coli刺激的影响,是遍在性表达.为进一步研究Mdubi的结构和功能,将Mdubi克隆到原核表达载体pQE30上,构建重组质粒pQE30-UBI,转化大肠杆菌M15感受态细胞,在IPTG诱导下进行了高效表达,SDS-PAGE检测表明Mdubi在大肠杆菌中可表达相对分子质量为9.6 kD的可溶性融合蛋白;Western blot分析表明表达产物能与Ni-NTA鏊合物特异性的结合,表明表达的Mdubi为N端带有6His标签的融合蛋白.利用Ni2+-NTA亲和柱一步纯化了Mdubi,以该融合蛋白免疫新西兰大白兔制备了抗Mdubi血清.本研究成功克隆了家蝇泛素的编码序列,并在原核细胞中得到了表达,为进一步研究泛素在家蝇体内的作用机制奠定了基础.
其他文献
This study investigated the effects of hormonal status and metabolic changes of restricted ewes during late pregnancy on the ovine fetus growth and development.
Diatom Skeletonema costatum Cleve is one of the main predominant phytoplankton species in the Changjiang Estuary in China. In order to provide some basic inform
Objective To analyze the impact of depletion of the twin arginine translocation (TAT) system on virulence and physiology of Yersinia enterocolitica for a better
以实例分析的方法,讨论了科技期刊编辑实践中如何根据专业知识准确选用术语,以及如何根据文段内容准确选用术语。
By means of case analysis, this article discusses how
A new process of directly smelting boron steel from boron-containing pig iron has been established. The starting material boron-containing pig iron was obtained
The uptake of zinc and cadmium by a species of marine diatom Thalassirosira weissflogii and the nutrient variation (phosphorus and silicon) in the culture mediu
A/mallard/Huadong/S/2005(S,IVPI=2.65)和A/mallard/Huadong/Y/2003(Y,IVPI=O),是对麻鸭具有不同致病力的病毒.两病毒的HA裂解位点区有2个氨基酸差异,S病毒在HA裂解位点区32
Annual and interannual variations of sea-level anomaly (SLA) in the Bay of Bengal and the Andaman Sea are investigated using altimeter-derived SLA data from 199
The Permian Lopingian in the Dianqiangui Basin and its adjacent areas is marked by the coal measures of the Wuchiapingian and the carbonate strata of the Changh
Mage-D1是黑素瘤相关抗原MAGE家族Ⅱ类的一个成员,不仅具有该家族所共有的MAGE保守序列MHD结构域,其N端还包含MHD2结构域和WQXPXX多肽重复结构域.与MAGEⅠ类成员不同的是,Mag