5种试剂盒对血浆游离DNA提取效果的比较

来源 :中国现代应用药学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kuaijizhidu2009
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目的筛选一种操作简单、快捷、成本低、提取效率高、易富集到短片段的血浆游离DNA(cell-free DNA,cf DNA)提取试剂盒。方法向健康人血浆中投入一定量的6种长度各异的非人源DNA,经5种试剂盒提取后,使用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,q PCR)定量,比较5种试剂盒提取回收率的差异。用上述试剂盒提取乳腺癌患者血浆cf DNA,并对其中6种不同长度的Kras基因片段进行定量,比较5种试剂盒对cf DNA提取效率的差异。结合提取成本、耗时等综合评价,最终筛选出最优试剂盒。结果试剂盒1对>157 bp的片段回收率最高(75.5%~87.4%),提取总cf DNA含量最高[(154.0±10.1)copies·μL-1血浆)],每个样本提取成本为274元、耗时73 min,但提取过程需要真空泵。试剂盒2对<157 bp的片段回收率在5个试剂盒中最高(31.8%~33.7%),对<145 bp的cf DNA提取效率最高[(81.7±6.2)copies·μL-1血浆)],提取总cf DNA含量[(137.1±13.9)copies·μL-1血浆)]仅次于试剂盒1,每个样本提取成本为15.6元、耗时43 min,无需特殊仪器。结论试剂盒1提取的cf DNA总量最高,但成本较高;对于提取片段分布<150 bp的cf DNA,宜选用试剂盒2,且性价比最高。
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