【摘 要】
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摘 要：猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDv）是冠状病毒属的成员之一，会引起哺乳仔猪急性发作严重的腹泻和呕吐，从而导致其大批死亡。PEDv最初发现于欧洲，现今已传播到亚洲。其在美国的首次出现时间为2013年5月，并且至2013年7月中旬，15个州确定存在PEDv。因此，美国急需快速、高通量的诊断检测方法，以进行血清学监测和监视。我们旨在设计可供
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摘 要：猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDv）是冠状病毒属的成员之一，会引起哺乳仔猪急性发作严重的腹泻和呕吐，从而导致其大批死亡。PEDv最初发现于欧洲，现今已传播到亚洲。其在美国的首次出现时间为2013年5月，并且至2013年7月中旬，15个州确定存在PEDv。因此，美国急需快速、高通量的诊断检测方法，以进行血清学监测和监视。我们旨在设计可供诊断室使用的PEDv的ELISA测定分析方法，以检测猪血清、口液和粪便中PEDv抗体。研究人员已完成了美国多个PEDv分离株的病毒颗粒（N）和纤突蛋白（spike protein）1区（S1）和2区（S2）的测序，发现它们的同源性在99 %以上。因此，任意分离株的重组蛋白都可以代表美国的PEDv分离株，且在酶联免疫吸附测定中应该能产生交叉反应。为了净化PEDv蛋白，笔者设计了PCR引物，以扩增N、S1和S2。随后，扩增的基因克隆到pET-25b和pMAL-p5X载体中，以进行细菌表达。两种载体将用于提高获得大量高纯度蛋白质的可能性。6X-his标签用于金属亲合蛋白（pET-25b）的纯化，而麦芽糖结合蛋白融合通过淀粉色谱分析法用于蛋白质纯化（pMAL-p5X）。纯合蛋白一旦获得，将要开发的直接ELISA法用于检测猪血清中PEDv抗体。血清检测中获得最佳ELISA结果的蛋白或蛋白融合物将进一步优化，以用于粪便和口液样本中病毒抗体的检测。
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