论文部分内容阅读
本文主要分析样品前处理对牛精子全蛋白质组鉴定的影响,文中对5种不同的蛋白质提取液和3种不同的酶解方法进行了系统地分析比较。5种蛋白质提取液:溶液BS(4% SDS, 0.1M Tris-HCl, 0.1M DTT);溶液BU(8M Urea, 0.1M Tris-HCl);溶液BT(7M Urea, 2M Thiourea, 0.1M Tris-HCl, 0.4% Chaps);溶液BR(购自Thermo,货号89901);溶液BD(2% SDC, 50mM NH4HCO3, 25mM NaCl)。3种酶解方法:溶液内酶解、胶内酶解以及膜上酶解(FASP)。实验结果显示:牛精子蛋白质提取能力BS最强,BU最弱;BT、BR以及BD相当。BS-FASP不适用于牛精子蛋白质组学研究。胶内酶解鉴定到的蛋白质均多于FASP法,但是胶内酶解操作过程复杂繁琐,耗时长。基于BD的溶液内酶解法鉴定到的蛋白质数量最多,膜蛋白提取鉴定能力较强,且操作时间最短,是较为理想的方法。