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以温敏型穿梭质粒pKC1139为基础,克隆安普霉素辛二糖合成酶基因aprK上下游序列作为同源交换臂,构建用于敲除aprK的重组质粒pBK5。pBK5转化E.coli ET12567后经接合转移导入黑暗链霉菌Tt-49,得到单交换菌株ST315。ST315经松弛传代后通过影印培养与PCR筛选得到aprK阻断突变株ST316。ST316发酵效价约1 500 ug/mL,发酵产物经TLC分析,发现安普霉素的生物合成被阻断,得到了一株主要产氨甲酰妥布霉素的工程菌。