【摘 要】
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目的:克隆小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因,并进行原核表达及蛋白纯化,为制备mNotch1的单克隆抗体做准备.方法:计算机分析小鼠Notch1全长,PCR扩增其胞外段高抗原区编码基因
【机 构】
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第四军医大学生理学教研室,石家庄国际和平医院检验科,第四军医大学遗传学与发育生物学教研室,第四军医大学口腔医学院
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目的:克隆小鼠Notch1胞外段高抗原区编码基因,并进行原核表达及蛋白纯化,为制备mNotch1的单克隆抗体做准备.方法:计算机分析小鼠Notch1全长,PCR扩增其胞外段高抗原区编码基因,克隆入载体T-vector进行序列测定,然后将测定正确的片段连入GST融合表达载体pGEX-4T-1,得到pG-NEF,转化宿主菌DH5α,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,以及新生条带表达形式分析以后,用GST亲和层析柱纯化.结果:小鼠Notch1分子胞外段近膜处约170个氨基酸区域抗原性较高,PCR扩增得到大小
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