【摘 要】
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为了制备高灵敏度、高特异性的抗新霉素单链抗体,试验采用从杂交瘤细胞中提取单链抗体基因,转入大肠杆菌表达系统进行表达。然后采用分子对接的方法研究抗新霉素单链抗体和新
【机 构】
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河南农业科学院动物免疫学重点实验室,郑州大学公共卫生学院
【基金项目】
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国家重点研究计划“高适应性重组抗体库的构建、筛选及进化技术研究”(2018YFC1602902)的大力支持
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为了制备高灵敏度、高特异性的抗新霉素单链抗体,试验采用从杂交瘤细胞中提取单链抗体基因,转入大肠杆菌表达系统进行表达。然后采用分子对接的方法研究抗新霉素单链抗体和新霉素分子的识别机制并进行虚拟突变,将关键结合位点的氨基酸残基进行突变,在对突变体进行表达和纯化后建立间接竞争酶联免疫吸附分析方法。结果表明:氨基酸残基Leu227为单链抗体与新霉素结合的关键氨基酸残基,将其突变为Asp,获得突变体。IC 50为1.58 ng/mL,相比于亲本单链抗体的26.23 ng/mL,突变体的敏感性提高了16.6倍。试验成
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