【摘 要】
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目的:MCPR1是我室利用消减杂交技术克隆出来的新基因,本研究利用融合蛋白制备MCPR1的多克隆抗体.方法:采用多聚酶链式反应(PCR)扩增出MCPR1基因蛋白编码序列,进一步将该基因
【机 构】
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第四军医大学口腔医学院组织病理教研室,第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心,第四军医大学生物化学教研室,第四军医大学遗传与发育教研室,第四军医大学西京医院神经外科
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目的:MCPR1是我室利用消减杂交技术克隆出来的新基因,本研究利用融合蛋白制备MCPR1的多克隆抗体.方法:采用多聚酶链式反应(PCR)扩增出MCPR1基因蛋白编码序列,进一步将该基因片段克隆到中间载体pGEX-T-e asy,再酶切得到MCPR1片段定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建融合表达载体pGEX-4T-MCPR1 ,在大肠杆菌中用IPTG进行诱导表达,得到GST-MCPR1融合蛋白,进行初步纯化及SDS-PAGE 电泳,直接割胶,将其作为抗原免疫兔子.结果:成功构建融合表达载体pGEX-4T-MCP R1,得到初步纯化的GST-MCPR1融合蛋白,免疫兔子1个月后,获得免疫血清,初步纯化得到多克隆抗体.Western印迹分析表明所得到的抗体具有较强的特异性,ELISA分析证实其效价为106.结论:MCPR1多克隆抗体的获得性为在蛋白水平研究新MCPR1的功能提供了实验基础,后续实验可以利用免疫分析技术研究MCPR1蛋白与其它蛋白质的相互作用,从而为阐明MCPR1在胚胎发育及腭裂形成中所发挥的作用提供实验手段.
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