【摘 要】
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通过改进的细胞核提取方法,获取了纯度较高的细胞核并建立了卤虫体外转录系统模型.将待检测基因与含转录起始位点的报告基因的编码序列相连,制备成体外转录模板.由于体外转录
【机 构】
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沈阳药科大学,国家海洋局第三海洋研究所
【基金项目】
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国家高技术研究发展计划(863计划)
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通过改进的细胞核提取方法,获取了纯度较高的细胞核并建立了卤虫体外转录系统模型.将待检测基因与含转录起始位点的报告基因的编码序列相连,制备成体外转录模板.由于体外转录所产生的RNA量极少,需要一种灵敏的方法检测生成的RNA.应用了RT-PCR技术鉴定体外转录产物的方法能有效解决这一问题.转录后,用无RNase的DNaseI将DNA模板完全降解;生成的RNA经逆转录反应合成cDNA,再以cDNA为模板,用相应的引物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳检测结果.该法灵敏度高,操作简单安全,无需同位素.
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