【摘 要】
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乙酰辅酶A合成酶（ACS）在微生物体内可直接将乙酸转化为乙酰辅酶A,乙酰辅酶A再进入微生物的碳代谢循环过程.为提高乙酸的利用效率,筛选催化活性较高的乙酰辅酶A合成酶,从大肠杆
【机 构】
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长春理工大学材料科学与工程学院; 中国科学院青岛生物能源与过程研究所中国科学院生物基材料重点实验室;
【基金项目】
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山东省自然科学基金项目(ZR 2015PB013);中国科学院重点部署项目(KGZD-EW-606-1-3)资助~~
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乙酰辅酶A合成酶（ACS）在微生物体内可直接将乙酸转化为乙酰辅酶A,乙酰辅酶A再进入微生物的碳代谢循环过程.为提高乙酸的利用效率,筛选催化活性较高的乙酰辅酶A合成酶,从大肠杆菌（Escherichia coli K-12）和巴氏醋酸杆菌（Acetobacter pasteurianus ATCC 33445）中扩增得到3个不同的乙酰辅酶A合成酶基因,将这3个基因分别连接到p ET-28a（+）载体上,Western Blot分析表明,3个基因均在E.coli BL21（DE3）中成功表达.对3个不同来源的乙酰辅酶A合成酶的酶活性进行比较,发现来自于巴氏醋酸杆菌的乙酰辅酶A合成酶（ACS2）具有较高的催化活力;其最适温度37℃,最适pH在7-8之间;在最适反应条件下,Km为1.16 mmol/L,最大反应速度(Vmax)为20.45 mmol L-1 min-1.将ACS2应用到以乙酸为底物生物合成甲羟戊酸过程中,当过表达ACS2时,单批补料发酵条件下,甲羟戊酸产量达到6.59g/L.本研究筛选到1种催化活性较高的乙酰辅酶A合成酶,显著提高了甲羟戊酸的生物合成,可为乙酰辅酶A合成酶的进一步研究和应用提供理论支持.（图8表1参18）
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