【摘 要】
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目的建立检测人诱骗受体3(DcR3)含量的ELISA方法。方法建立固相双抗体夹心法定量检测DcR3:用抗DcR3抗体包被ELISA板,捕捉样本中DcR3,再加入生物素标记的抗DcR3抗体及亲合素标
【基金项目】
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国家科技部国际合作项目(2015DFA31770);福建省发改委重点项目(FGW2014);福建省科技厅产学研项目(2014Y4002)
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目的建立检测人诱骗受体3(DcR3)含量的ELISA方法。方法建立固相双抗体夹心法定量检测DcR3:用抗DcR3抗体包被ELISA板,捕捉样本中DcR3,再加入生物素标记的抗DcR3抗体及亲合素标记的辣根过氧化物酶,形成含酶的固相复合物,最后以底物显色,以同板上的标准曲线定量。对所建立的方法进行灵敏度、特异性、精密度、回收率、线性范围及血浆DcR3参考范围的评估。结果所建立方法分析灵敏度为0.051 ng/m L,重复性和期间精密度分别小于10%和15%,平均回收率为90.50%。在包被抗体中加入2倍量抗TNF-α、在检测抗体中加入10倍量生物素标记的抗LIGHT、抗FAS或抗TNF-α或在DcR3标准品中加入10倍量的LIGHT纯蛋白,均不影响标准曲线的状态。检测方法的线性范围为0.25~16 ng/m L(r≥0.98)。128例正常成人血浆DcR3的均值为(0.21±0.05)ng/m L,95%可信限参考值范围为0.14~0.28 ng/m L,无年龄及性别差异。结论所建立的ELISA检测方法具有特异性高、灵敏度、精密度及线性好、可测范围大等特点,可用于检测人血DcR3含量。
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