【摘 要】
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为系统评估重组毕赤酵母植酸酶的N-糖基化充分性，建立了一种通过联用高效液相色谱-串级质谱来分析植酸酶氨基酸序列及N-糖基化位点的技术.分别发酵了3株基因组已整合不同植酸
【机 构】
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广东省农业科学院农业生物基因研究中心
【基金项目】
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国家自然科学基金青年基金项目(31501633);广东省农业攻关引导项目(2012B020305011);广东省自然科学基金博士启动项目(2015A030310368)
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为系统评估重组毕赤酵母植酸酶的N-糖基化充分性，建立了一种通过联用高效液相色谱-串级质谱来分析植酸酶氨基酸序列及N-糖基化位点的技术.分别发酵了3株基因组已整合不同植酸酶基因的毕赤酵母.发酵液上清经离子交换与凝胶过滤后获得纯化的植酸酶.使用PNGase F或Endo H脱糖基化酶处理植酸酶后，用胰蛋白酶消化脱糖基化产物.通过纳升级高效液相色谱分离胰蛋白酶切产生的肽段混合物.并在联用的串级质谱上进行肽段测序与N-糖基化位点鉴定.结果显示3种植酸酶蛋白的可检测序列覆盖率均在69%以上，且与文献报道不同，均存在
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