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摘 要：目的：优选香附的醋炙工艺。方法：对同一批香附药材，使用挥发油提取法提取挥发油定量，以及使用薄层色谱法鉴别香附中的α-香附酮定性，并对薄层色谱图中α-香附酮所展开的斑点打分（对照品在薄层板上的点样量均为2uL，供试品在薄层板上的点样量均为5uL）作为内在指标，同时以醋炙香附的性状、外观作为外在指标，采用L9（33）正交试验法，考察醋炙香附的闷润时间、炒制温度、炒制时间，使用醋炙香附中挥发油的量和薄层色谱图中α-香附酮所展开斑点的分数加权评分作为依据，优选出香附的最佳醋炙工艺，对香附的最佳醋炙工艺进行验证实验，最终对筛选出的最佳香附醋炙工艺，使用车间电加热炒药机进行稳定性实验，判断此次实验能否用于车间大生产，结果表明此次实验可以对车间醋炙香附的实际生产提供指导依据。结果：优选出香附的最佳醋炙工艺为：闷润时间为2h；炒制温度为100℃；炒制时间为15min。结论：稳定性实验表明优选出的香附醋炙工艺稳定可行，对实现香附醋炙的大批量生产及其质量控制提供指导依据。
关键词：正交试验；香附；醋炙工艺；挥发油；α-香附酮；薄层色谱法
中图分类号：R283.3 文献标识码：A 文章编号：1004-7344（2018）17-0342-03
香附为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根茎。秋季采挖，燎去毛须，置沸水中略煮或蒸透后晒干，或燎后直接晒干[1]。香附中含葡萄糖8.3～9.1%、果糖1.0～1.7%、淀粉40～41.1%、挥发油0.65～1.4%[3]。香附中主要含有挥发油，油中主要成分為α-香附酮、β-香附酮、芹子烯、广藿香酮。此外，还有黄酮类和萜类化合物等。香附醋炙后，总挥发油含量比生香附降低35%左右。醋炙后的香附专入肝经，舒肝止痛作用增强，并能消积化滞[4]。《中华人民共和国药典》一部附录ⅡD醋炙通则醋炙法规定中并没有对醋炙香附的闷润时间、炒制温度、炒制时间等作相关的规定，在目前的实际生产中操作工主要以香附醋炙后的外观性状，结合自身的经验来判断，存在个人误差，难以标准化。本实验采用香附中挥发油的含量，以及薄层色谱法定性醋炙香附中α-香附酮作为内在指标，综合加权评分，并以醋炙香附的外观性状为外在指标，结合正交试验法对香附的醋炙工艺进行研究，优选香附醋炙的最佳炮制工艺。
1 实验仪器与实验材料
1.1 实验仪器
CY-700电热炒药机（周口制药机械有限公司）；美的多功能电磁炉（广东美的生活电器制造有限公司）；600g摇摆式高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；双杰牌系列电子天平（美国双杰集团有限公司、常熟市双杰测试仪器厂，型号：JJ5000 5000g/0.1g）；DETW调温电热套（北京市永光明医疗仪器厂）；ZF-I三用紫外分析仪；玻璃点样毛细管（华西医科大学仪器厂）；硅胶GF254薄层板）；挥发油提取器（；回流冷凝管；玻璃喷雾瓶；1000mL圆底烧瓶，50mL锥形瓶。
1.2 实验材料
米醋（昆明拓东调味食品有限公司，批号：1509015）；香附（昆明中药厂有限公司原料库提供，批号：515-799-804）；α-香附酮对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110748-200608）；蒸馏水；硅胶（青岛鼎康硅胶有限公司）；乙醚（重庆川东化工有限公司，批号：20141101）；二氯甲烷（重庆川东化工有限公司，批号：20130901）；乙酸乙酯（重庆川东化工有限公司，批号：20150201）；冰醋酸（重庆川东化工有限公司，批号：20111201）；二硝基苯肼试液，批号：20150924）；消泡剂。
2 实验方法
2.1 正交试验设计
2.1.1 香附醋炙正交试验设计
通过对炒药机性能、车间生产环境、目前国内的研究及现版《中华人民共和国药典》中香附醋炙方法的考察，最终选取闷润时间（A）、炒制时间（B）、炒制温度（C）作为考察因素，每个因素设计与之相应的三个水平，设计因素水平表见表1，正交表安排及试验结果见表2。
2.1.2 样品的制备
取同一批香附20kg，除去其中的杂质及非药用部位，如砂石、碎屑等，取除去杂质后的净香附9kg混合均匀，平均分为9份，每份1kg；取米醋（昆明拓东醋，酸总量以乙酸计≧3.50g/100mL）1.8kg，每份香附使用米醋20%，将米醋与香附拌匀后，9组香附药材按照正交试验表的安排置于电磁炉中进行醋炙。香附醋炙的具体方法：取净香附，加米醋（20%量）拌匀，按照正交试验设计表中的闷润时间闷透，置锅内按照正交试验设计表中的炒制温度及炒制时间炒制，按照2010版《中华人民共和国药典》一部附录ⅡD炒至香附表面黑褐色。微有醋香气，味微苦。取出，放凉，筛去碎屑，按照四分法取样法取样，每份样品取样110g，装入取样袋中，并贴上标签。醋炙后的香附样品分别用600g摇摆式高速万能粉碎机粉碎使能通过二号至三号筛，并混合均匀。即得1～9号样品。
2.1.3 样品中挥发油的提取
按照2010版《中华人民共和国药典》附录XD挥发油提取法测定，分别称取50g醋炙香附样品，放入圆底烧瓶中，加入适量沸石及消泡剂，及适量蒸馏水，振摇混合后，把圆底烧瓶放入电热套中，连接挥发油测定器与回流冷凝管，自冷凝管上端加入蒸馏水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入圆底烧瓶为止。缓缓加热至沸，并保持微沸5h，至测定器中挥发油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm为止放置1h以上，在开启活赛使油层下降到其上端恰与0刻度线平齐，读取挥发油量，并计算挥发油的含量（%）。
2.1.4 薄层色谱法鉴别醋炙香附中的α-香附酮
按照2010版《中华人民共和国药典》一部，取香附样品1g，加乙醚5mL，放置1h，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5mL使溶解，作为供试品溶液，另取α-香附酮对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含1mg的溶液作为对照品溶液，照2010版《中华人民共和国药典》薄层色谱法附录ⅥB试验，吸取对照品溶液2uL，供试品溶液5uL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸（80：1：1）为展开剂，展开，（置254nm紫外灯下视检），供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的深蓝色斑点；喷以二硝基苯肼试液，放置片刻，斑点渐变为橙红色。所得的薄层色谱图见图1。 表2以醋炙香附中所含挥发油的量和薄层色谱图中α-香附酮所展开斑点的分数加权评分为指标，优选香附的醋炙工艺，由于香附中的主要成分为挥发油，在醋炙过程中挥发油的含量会明显减少，挥发油中的主要成分为α-香附酮，在炮制过程中α-香附酮的含量减少，应用加权评分法处理数据，加权评分=挥发油含量×60%+α-香附酮所展开斑点所得分数×40%，实验结果见表2。
2.1.5 实验结论（以醋炙香附中挥发油含量及薄层色谱图中α-香附酮所展开的斑点为指标）
由表2數据分析可知，各因素对醋炙香附中挥发油含量以及α-香附酮所展开斑点的情况的影响依次为B>A>C。由表3方差分析可知炒制时间对香附醋炙的工艺影响最大，综合分析香附的最佳醋炙工艺为A3B3C1，即闷润时间为2h，炒制时间为15min，炒制温度为100℃。
2.2 验证实验
2.2.1 实验方法
按照优选出的工艺，安排6次实验，使用同一批拣选后的净香附6kg，分为6份，每份1kg，取同一批米醋（昆明拓东醋，酸总量以乙酸计≧3.50g/100mL）1.2kg，每份香附使用米醋20%，根据表4优选工艺的实验安排及“2.1.2”项下方法进行香附样品的制备，以“2.1.3”项下方法提取香附醋炙样品中的挥发油，以“2.1.4”项下方法鉴别醋炙香附中α-香附酮所展开斑点的情况，所得薄层色谱图谱见图2。
2.2.2 实验结论
由表4数据分析及图2中α-香附酮所展开斑点的情况可知，以挥发油的含量为指标优选出的工艺：A3B3C1，即闷润时间为2h，炒制时间为15min，炒制温度为100℃，实验中1～6号样品中挥发油的量为1.0～1.2%，均值为1.06%，且在同一薄层板及相同的点样量下α-香附酮所展开的斑点清晰明确，综合分析得到此工艺为香附的最佳醋炙工艺。
2.3 稳定性实验
2.3.1 实验方法
由于优选的香附的最佳醋炙工艺未包含在正交表安排的9次实验中，及上述实验所使用的香附均为同一批，所以安排此次稳定性实验，用于验证此次工艺是否可以用于车间的大生产，使用三批拣选后的净香附，每批15kg，共45kg，取同一批米醋（昆明拓东醋，酸总量以乙酸计≧3.50g/100mL）9kg，每份香附使用米醋20%，根据优选出的最佳醋炙工艺，闷润2h，炒制15min，炒制温度100℃，放入电加热炒药机中进行炮制，按照“2.1.2”项下方法进行香附醋炙样品的制备，以“2.1.3”项下方法提取香附醋炙样品中的挥发油，以“2.1.4”项下方法鉴别醋炙香附挥发油中的主要成分α-香附酮所展开斑点的情况，所得薄层色谱图见图3，所含挥发油量及使用电加热炒药机醋炙后香附的性状见表5。
2.3.2 实验结论
从表5醋炙香附中所含的挥发油的量及图3中醋炙后香附中α-香附酮所展开的斑点可知，按照优选出的最佳醋炙工艺投入电加热炒药机中进行炮制，所得的醋炙香附样品中挥发油含量在1.0～1.1%，RSD为5.41%，醋炙后香附中挥发油的含量≧0.8%，符合2010版《中华人民共和国药典》一部中关于醋炙香附的规定，薄层色谱图中α-香附酮所展开斑点的情况较好，电加热炒药机醋炙后的香附表面黑褐色，比起原药材更有光泽，所得实验结果表明使用正交法优选出的香附醋炙工艺具有良好的稳定性，对大生产有一定的指导意义及质量控制。
3 小 结
香附始载于《名医别录》，用药历史悠久，在临床上的应用广泛，被历代医家誉为“乃气病之总司，女科之主帅”[6]。同时炮制方法多样，炮制后能达到某些特殊的功效，2010版《中华人民共和国药典》一部中收载香附和醋炙香附，醋炙后香附的解痉、镇痛作用优于生品，疏肝止痛作用增强，药理作用增加，目前对醋炙香附的用药需求大，多个中成药配方中都以醋炙香附作为主药。香附的主要有效成分为α-香附酮，在醋炙香附的过程中，香附药材受高温长时间炒制，有效成分遭到一定的破坏，导致α-香附酮的含量降低[9]。但现版《中华人民共和国药典》对醋炙香附的闷润时间、炒制时间、炒制温度等并没有做明确的规定，主要以操作工的经验来判断醋炙的程度，此次实验使用醋炙香附中挥发油的含量以及运用薄层色谱法对挥发油中的主要成分α-香附酮定性，采用正交试验法优选出香附的最佳醋炙工艺，通过验证试验，以及使用车间电加热炒药机进行稳定性实验，实验结果表明炒制时间对香附的醋炙工艺影响显著，由稳定性实验可知此次实验方法稳定可行，对规范车间大批量生产醋炙香附，香附的醋炙工艺及醋炙香附的质量控制等提供指导依据。
参考文献
[1]国家药典委员会中华人民共和国药典2010版（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：241.
[2]国家药典委员会中华人民共和国药典2010版（二部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010：1327.
[3]宋立人，洪 询，丁绪亮，等.现代中药学大辞典.北京：人民卫生出版社，2001.
[4]龚千锋，张振凌，吴纯洁，等.中药炮制学[M].北京：中国中医药出版社，2012，8：233～235.
[5]陈华师，杨克义，郑芝銮，等.醋蒸香附炮制工艺研究[J].中草药，2013，19：2693～2695.
[6]卢君蓉，王世宇，傅超美，等.香附醋制工艺的优化研究[J].成都中医药大学学报，2012，01：60～62.
[7]张义生，韩顺意，张南方，等.彭银亭四制香附炮制工艺[J].中国医院药学杂志，2012，24：2017～2019.
[8]胡志方，谢 颖，胡律江，等.香附不同炮制方法的品质比较[J].江西中医学院学报，2010，06：48～49.
[9]鲁湘鄂，许腊英，汪洪武，等.醋炙香附炮制工艺研究[J].西北药学杂志，2007，02：58～59.
[10]黄开云，张晓燕，杨娜娜.正交试验法优化香附醋炙新工艺[J].中国药师，2013，04：543～545.
[11]周建芽，詹秉复.香附炮制工艺沿革[J].江西中医学院学报，1997，03：29～31.
[12]滕海英，祝国强，黄 平，等.正交试验设计实例分析[J].药学服务与研究，2008，01：75～76.
收稿日期：2018-5-15
作者简介：薛安平（1983-），男，汉族，云南昆明人，工程师，本科，主要从事制药工艺研究工作。
关键词：正交试验；香附；醋炙工艺；挥发油；α-香附酮；薄层色谱法
中图分类号：R283.3 文献标识码：A 文章编号：1004-7344（2018）17-0342-03
香附为莎草科植物莎草Cyperus rotundus L.的干燥根茎。秋季采挖，燎去毛须，置沸水中略煮或蒸透后晒干，或燎后直接晒干[1]。香附中含葡萄糖8.3～9.1%、果糖1.0～1.7%、淀粉40～41.1%、挥发油0.65～1.4%[3]。香附中主要含有挥发油，油中主要成分為α-香附酮、β-香附酮、芹子烯、广藿香酮。此外，还有黄酮类和萜类化合物等。香附醋炙后，总挥发油含量比生香附降低35%左右。醋炙后的香附专入肝经，舒肝止痛作用增强，并能消积化滞[4]。《中华人民共和国药典》一部附录ⅡD醋炙通则醋炙法规定中并没有对醋炙香附的闷润时间、炒制温度、炒制时间等作相关的规定，在目前的实际生产中操作工主要以香附醋炙后的外观性状，结合自身的经验来判断，存在个人误差，难以标准化。本实验采用香附中挥发油的含量，以及薄层色谱法定性醋炙香附中α-香附酮作为内在指标，综合加权评分，并以醋炙香附的外观性状为外在指标，结合正交试验法对香附的醋炙工艺进行研究，优选香附醋炙的最佳炮制工艺。
1 实验仪器与实验材料
1.1 实验仪器
CY-700电热炒药机（周口制药机械有限公司）；美的多功能电磁炉（广东美的生活电器制造有限公司）；600g摇摆式高速万能粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；双杰牌系列电子天平（美国双杰集团有限公司、常熟市双杰测试仪器厂，型号：JJ5000 5000g/0.1g）；DETW调温电热套（北京市永光明医疗仪器厂）；ZF-I三用紫外分析仪；玻璃点样毛细管（华西医科大学仪器厂）；硅胶GF254薄层板）；挥发油提取器（；回流冷凝管；玻璃喷雾瓶；1000mL圆底烧瓶，50mL锥形瓶。
1.2 实验材料
米醋（昆明拓东调味食品有限公司，批号：1509015）；香附（昆明中药厂有限公司原料库提供，批号：515-799-804）；α-香附酮对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110748-200608）；蒸馏水；硅胶（青岛鼎康硅胶有限公司）；乙醚（重庆川东化工有限公司，批号：20141101）；二氯甲烷（重庆川东化工有限公司，批号：20130901）；乙酸乙酯（重庆川东化工有限公司，批号：20150201）；冰醋酸（重庆川东化工有限公司，批号：20111201）；二硝基苯肼试液，批号：20150924）；消泡剂。
2 实验方法
2.1 正交试验设计
2.1.1 香附醋炙正交试验设计
通过对炒药机性能、车间生产环境、目前国内的研究及现版《中华人民共和国药典》中香附醋炙方法的考察，最终选取闷润时间（A）、炒制时间（B）、炒制温度（C）作为考察因素，每个因素设计与之相应的三个水平，设计因素水平表见表1，正交表安排及试验结果见表2。
2.1.2 样品的制备
取同一批香附20kg，除去其中的杂质及非药用部位，如砂石、碎屑等，取除去杂质后的净香附9kg混合均匀，平均分为9份，每份1kg；取米醋（昆明拓东醋，酸总量以乙酸计≧3.50g/100mL）1.8kg，每份香附使用米醋20%，将米醋与香附拌匀后，9组香附药材按照正交试验表的安排置于电磁炉中进行醋炙。香附醋炙的具体方法：取净香附，加米醋（20%量）拌匀，按照正交试验设计表中的闷润时间闷透，置锅内按照正交试验设计表中的炒制温度及炒制时间炒制，按照2010版《中华人民共和国药典》一部附录ⅡD炒至香附表面黑褐色。微有醋香气，味微苦。取出，放凉，筛去碎屑，按照四分法取样法取样，每份样品取样110g，装入取样袋中，并贴上标签。醋炙后的香附样品分别用600g摇摆式高速万能粉碎机粉碎使能通过二号至三号筛，并混合均匀。即得1～9号样品。
2.1.3 样品中挥发油的提取
按照2010版《中华人民共和国药典》附录XD挥发油提取法测定，分别称取50g醋炙香附样品，放入圆底烧瓶中，加入适量沸石及消泡剂，及适量蒸馏水，振摇混合后，把圆底烧瓶放入电热套中，连接挥发油测定器与回流冷凝管，自冷凝管上端加入蒸馏水使充满挥发油测定器的刻度部分，并溢流入圆底烧瓶为止。缓缓加热至沸，并保持微沸5h，至测定器中挥发油量不再增加，停止加热，放置片刻，开启测定器下端的活塞，将水缓缓放出，至油层上端到达刻度0线上面5mm为止放置1h以上，在开启活赛使油层下降到其上端恰与0刻度线平齐，读取挥发油量，并计算挥发油的含量（%）。
2.1.4 薄层色谱法鉴别醋炙香附中的α-香附酮
按照2010版《中华人民共和国药典》一部，取香附样品1g，加乙醚5mL，放置1h，时时振摇，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯0.5mL使溶解，作为供试品溶液，另取α-香附酮对照品，加乙酸乙酯制成每1mL含1mg的溶液作为对照品溶液，照2010版《中华人民共和国药典》薄层色谱法附录ⅥB试验，吸取对照品溶液2uL，供试品溶液5uL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以二氯甲烷-乙酸乙酯-冰醋酸（80：1：1）为展开剂，展开，（置254nm紫外灯下视检），供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的深蓝色斑点；喷以二硝基苯肼试液，放置片刻，斑点渐变为橙红色。所得的薄层色谱图见图1。 表2以醋炙香附中所含挥发油的量和薄层色谱图中α-香附酮所展开斑点的分数加权评分为指标，优选香附的醋炙工艺，由于香附中的主要成分为挥发油，在醋炙过程中挥发油的含量会明显减少，挥发油中的主要成分为α-香附酮，在炮制过程中α-香附酮的含量减少，应用加权评分法处理数据，加权评分=挥发油含量×60%+α-香附酮所展开斑点所得分数×40%，实验结果见表2。
2.1.5 实验结论（以醋炙香附中挥发油含量及薄层色谱图中α-香附酮所展开的斑点为指标）
由表2數据分析可知，各因素对醋炙香附中挥发油含量以及α-香附酮所展开斑点的情况的影响依次为B>A>C。由表3方差分析可知炒制时间对香附醋炙的工艺影响最大，综合分析香附的最佳醋炙工艺为A3B3C1，即闷润时间为2h，炒制时间为15min，炒制温度为100℃。
2.2 验证实验
2.2.1 实验方法
按照优选出的工艺，安排6次实验，使用同一批拣选后的净香附6kg，分为6份，每份1kg，取同一批米醋（昆明拓东醋，酸总量以乙酸计≧3.50g/100mL）1.2kg，每份香附使用米醋20%，根据表4优选工艺的实验安排及“2.1.2”项下方法进行香附样品的制备，以“2.1.3”项下方法提取香附醋炙样品中的挥发油，以“2.1.4”项下方法鉴别醋炙香附中α-香附酮所展开斑点的情况，所得薄层色谱图谱见图2。
2.2.2 实验结论
由表4数据分析及图2中α-香附酮所展开斑点的情况可知，以挥发油的含量为指标优选出的工艺：A3B3C1，即闷润时间为2h，炒制时间为15min，炒制温度为100℃，实验中1～6号样品中挥发油的量为1.0～1.2%，均值为1.06%，且在同一薄层板及相同的点样量下α-香附酮所展开的斑点清晰明确，综合分析得到此工艺为香附的最佳醋炙工艺。
2.3 稳定性实验
2.3.1 实验方法
由于优选的香附的最佳醋炙工艺未包含在正交表安排的9次实验中，及上述实验所使用的香附均为同一批，所以安排此次稳定性实验，用于验证此次工艺是否可以用于车间的大生产，使用三批拣选后的净香附，每批15kg，共45kg，取同一批米醋（昆明拓东醋，酸总量以乙酸计≧3.50g/100mL）9kg，每份香附使用米醋20%，根据优选出的最佳醋炙工艺，闷润2h，炒制15min，炒制温度100℃，放入电加热炒药机中进行炮制，按照“2.1.2”项下方法进行香附醋炙样品的制备，以“2.1.3”项下方法提取香附醋炙样品中的挥发油，以“2.1.4”项下方法鉴别醋炙香附挥发油中的主要成分α-香附酮所展开斑点的情况，所得薄层色谱图见图3，所含挥发油量及使用电加热炒药机醋炙后香附的性状见表5。
2.3.2 实验结论
从表5醋炙香附中所含的挥发油的量及图3中醋炙后香附中α-香附酮所展开的斑点可知，按照优选出的最佳醋炙工艺投入电加热炒药机中进行炮制，所得的醋炙香附样品中挥发油含量在1.0～1.1%，RSD为5.41%，醋炙后香附中挥发油的含量≧0.8%，符合2010版《中华人民共和国药典》一部中关于醋炙香附的规定，薄层色谱图中α-香附酮所展开斑点的情况较好，电加热炒药机醋炙后的香附表面黑褐色，比起原药材更有光泽，所得实验结果表明使用正交法优选出的香附醋炙工艺具有良好的稳定性，对大生产有一定的指导意义及质量控制。
3 小 结
香附始载于《名医别录》，用药历史悠久，在临床上的应用广泛，被历代医家誉为“乃气病之总司，女科之主帅”[6]。同时炮制方法多样，炮制后能达到某些特殊的功效，2010版《中华人民共和国药典》一部中收载香附和醋炙香附，醋炙后香附的解痉、镇痛作用优于生品，疏肝止痛作用增强，药理作用增加，目前对醋炙香附的用药需求大，多个中成药配方中都以醋炙香附作为主药。香附的主要有效成分为α-香附酮，在醋炙香附的过程中，香附药材受高温长时间炒制，有效成分遭到一定的破坏，导致α-香附酮的含量降低[9]。但现版《中华人民共和国药典》对醋炙香附的闷润时间、炒制时间、炒制温度等并没有做明确的规定，主要以操作工的经验来判断醋炙的程度，此次实验使用醋炙香附中挥发油的含量以及运用薄层色谱法对挥发油中的主要成分α-香附酮定性，采用正交试验法优选出香附的最佳醋炙工艺，通过验证试验，以及使用车间电加热炒药机进行稳定性实验，实验结果表明炒制时间对香附的醋炙工艺影响显著，由稳定性实验可知此次实验方法稳定可行，对规范车间大批量生产醋炙香附，香附的醋炙工艺及醋炙香附的质量控制等提供指导依据。
参考文献
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收稿日期：2018-5-15
作者简介：薛安平（1983-），男，汉族，云南昆明人，工程师，本科，主要从事制药工艺研究工作。