【摘 要】
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目的 观察5非编码区(5UTR)嘧啶富集区变异对B组柯萨奇病毒1型(CVB1)毒力和致病性的影响.方法 定点诱变将CVB1基因组5UTR第563～573碱基嘧啶富集区5个嘧啶置换为嘌呤,获得突变株
【机 构】
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黑龙江省感染与免疫重点实验室,内蒙古民旅大学临床医学院微生物和免疫学教研室,哈尔滨医科大学细胞生物学教研室
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目的 观察5非编码区(5UTR)嘧啶富集区变异对B组柯萨奇病毒1型(CVB1)毒力和致病性的影响.方法 定点诱变将CVB1基因组5UTR第563～573碱基嘧啶富集区5个嘧啶置换为嘌呤,获得突变株CVB1/m563-573.空斑纯化病毒后,利用细胞病变效应(CPE)试验、空斑形成试验、一步生长曲线和半数致死量(LD50)等方法比较CVB1/m563-573与其原型株CVB1/wt的毒力.结果 测序结果显示,CVB1/m563-573的5UTR嘧啶富集区发生C565A、U567C、U568A、U570A、U572G突变,与预期一致.CPE试验表明,CVB1/m563-573的感染性较CVB1/wt稍弱(A 490分别为0.710±0.074、0.812±0.092),但差异无统计学意义(t=-2.204,P>0.05).空斑形成试验显示,46、58 h时间点CVB1/m563-573形成空斑的数量为(6.40±1.52)×103、(11.60±2.19)×103 pfu(空斑形成单位)/L,直径为(2.00±0.35)、(2.47±0.41)mm,CVB1/wt的空斑数量为(8.40±2.51)×103、(11.80±1.92)×103 pfu/L,直径为(1.80±0.27)、(2.85±0.44)mm,二者比较差异无统计学意义(t值分别为8.000、0.985、10.000、9.000,P均>0.05).一步生长曲线法显示,经过3、5、7 h的扩增,CVB1/m563-573所得的活病毒颗粒数(×103 pfu/L)的常用对数(lg)分别为2.10±0.09、4.28±0.03、7.44±0;CVB1/wt的活病毒颗粒数(×103 pfu/L)的lg值分别为2.80±0.02、4.77±0.02、8.55±0.01.CVB1/m563-573株在3个时间点均较CVB1/wt复制显著慢(t值分别为-13.151、-24.319、-47.714,P均
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