【摘 要】
：
目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰技术诱导小鼠树突状细胞OX40L基因沉默对调节性T细胞的影响. 方法 设计针对小鼠OX40L基因的RNA于扰序列,通过外源筛靶筛选出干扰效果最佳的序列.以293T为包装细胞,制备含OX40L的siRNA序列的慢病毒载体OX40L-RNAi-LV和阴性对照载体NC-GFP-LV.采用磁式分选器分离培养骨髓来源的小鼠树突状细胞(DCs),以MOI为25进行转染,分别将转
【机 构】
：
100044,北京大学人民医院肝胆外科中心北京大学器官移植中心,100044,北京大学人民医院肝胆外科中心北京大学器官移植中心,美国匹兹堡大学ThomasE.Starzl器官移植研究所,100044,
论文部分内容阅读
目的 探讨慢病毒介导的RNA干扰技术诱导小鼠树突状细胞OX40L基因沉默对调节性T细胞的影响. 方法 设计针对小鼠OX40L基因的RNA于扰序列,通过外源筛靶筛选出干扰效果最佳的序列.以293T为包装细胞,制备含OX40L的siRNA序列的慢病毒载体OX40L-RNAi-LV和阴性对照载体NC-GFP-LV.采用磁式分选器分离培养骨髓来源的小鼠树突状细胞(DCs),以MOI为25进行转染,分别将转染OX40L-RNAi-LV(实验组)、转染NC-GFP-LV(阴性对照组)和未转染(空白对照组)的DCs与磁式分选器分选得到的CD4+CD25+T调节细胞共培养,6 d后通过流式细胞仪检测T调节细胞的增殖和凋亡情况. 结果外源筛靶筛选出干扰效果最佳的RNA干扰序列(靶序列为GCTCATACAAGAATGAGTA),OX40L蛋白表达的抑制率为73.1%.感染复数为25时,慢病毒载体感染DCs的效率为86.4%.DCs与CD4+CD25+T调节细胞共培养后,实验组的凋亡细胞比例为8.7%,显著低于阴性对照组(20.1%)和空白对照组(19.8%),F=244.22,P=0.000;而增殖细胞前体频率为38.3%,明显高于阴性对照组(24.5%)和空白对照组(22.9%),F=95.40,P=0.000.结论 小鼠OX40L的siRNA慢病毒载体可以有效降低树突状细胞OX40L的表达,对体外培养的CD4+CD25+T调节细胞具有显著地促进增殖、减少凋亡的作用。
其他文献
目的 研究腺病毒(adenovirus,Ad)介导的ING4基因(Ad-ING4)表达对人乳腺癌的生长抑制作用.方法 采用Ad-ING4腺病毒感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,RT-PCR、Western blot 法检测ING4基因在肿瘤细胞中的转录和表达;四唑盐(MTT)法、Hochest33258染色法和流式细胞仪(FCM)检测ING4基因的表达对乳腺癌细胞的生长抑制、周期变化和凋亡效应
患者男,66岁.因"上腹部疼痛2 d加重伴发热1 d"于2009年6月7日入院.患者2 d前无明显诱因下出现上腹部剧烈疼痛,伴恶心、呕吐.1 d前患者上腹痛呈进行性加重,不能自行缓解,并出现发热达38.5℃。
肾移植手术切口一般选择在右下腹或左下腹,其特点是切开腹壁将腹膜推开进入髂窝而不进入腹腔,在髂窝内完成移植肾血管重建和尿路重建,肾移植术后切口疝由于解剖关系相对复杂,修补有一定难度.自2005-2009年我院完成腹腔镜下修补肾移植术后腹壁切口疝8例,现报告如下。
患儿,男,于5.5个月龄时因"身目黄染3个月"来我院就诊,经检查确诊为先天性胆道闭锁、晚期胆汁性肝硬化.肝移植是挽救该患儿的惟一有效手段,患儿38岁的母亲自愿成为肝脏供体,我院伦理委员会讨论并通过其申请。
目的 探讨肝移植术后肝癌复发对HBV再感染的影响.方法 回顾性分析285例原发病为乙肝相关性疾病且术后随访超过半年的原位肝移植患者资料.结果 285例肝移植患者随访时间为6～59个月,术后HBV再感染10例,再感染率为3.5%.其中9例患者合并肝癌复发,HBV再感染发生于肝癌复发后1～7个月.肝癌复发患者与肝癌未复发和良性肝病患者HBV再感染的差异具有统计学意义.13例肝癌复发或转移灶切除标本中有
在过去10年里,胸主动脉瘤腔内修复术(thoracic aortic aneurysm endovascular repair,TEVAR)由于其微创的优势,使得并发症发生率及死亡率均明显下降,已经逐步代替传统外科手术成为首选的治疗方式。
我院自1990年1月至2008年12月共收治胃、十二指肠、胰腺联合损伤18例,行十二指肠憩室化术5例,胰体尾部切除术8例.另外我们还应用间置空肠Roux-en-Y吻合术治疗一种特殊类型的胃十二指肠断裂合并胰腺颈体部断裂伤5例,取得了满意疗效.现将三种术式进行比较,并探讨间置空肠Roux-en-Y吻合术在治疗胃十二指肠断裂合并胰腺颈体部断裂伤中的临床应用价值。
目的 观察大鼠肝移植术后早期肝组织内氧化还原因子1(redox factor-1,Ref-1)蛋白表达与肝脏损伤的关系.方法 将150只Wistar大鼠动物分为三个组,肝移植组、假手术组和空白对照组.分别于肝移植术后3、6、9、12、24 h取材,采用免疫组织化学方法检测移植后各时间肝组织Ref-1蛋白表达,同时通过血清生化指标、组织病理学分析研究Ref-1蛋白表达的意义.结果 血清学检查显示,肝
新近研究表明,非甾体抗炎剂(NSAIDs)类药物能预防结肠腺瘤和腺癌发生及抑制多种肿瘤的生长[1].研究显示,NSAIDs抑瘤作用除了研究较多的COX-2途径外,另存在非COX-2途径,而后一途径与诱导下游基因Nag-1表达有关[2].本研究构建Nag-1基因载体,将其转染胃癌细胞株SGC-7901和MKN-28,观察对胃癌细胞生长、凋亡与侵袭能力的影响。
目的 研究观察出现手术中出血并发症后使用或者预防使用重组活化人凝血因子Ⅶ(γFVKa)的止血效果.方法 回顾分析56例外科患者(53例为肝胆外科疾病患者,3例胃肠疾病患者)使用重组活化人凝血因子Ⅶ(γfⅦa)的止血效果,分析术中使用(12例),肝移植术前预防(30例)以及术后使用(14例)的治疗效果.结果 12例患者术中出血时使用.11例患者使用后迅速止血.其中1例肝移植患者以及1例肝癌患者术中成