【摘 要】
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目的 探讨SIRT1对干细胞成软骨、成骨分化的调控作用及机制.方法 C3H10T1/2感染腺病毒Ad-SIRT1后于普通培养基培养,通过荧光显微镜了解腺病感染情况,采用Weste blot验证目的
【机 构】
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400016重庆,重庆医科大学附属第一医院骨科;
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目的 探讨SIRT1对干细胞成软骨、成骨分化的调控作用及机制.方法 C3H10T1/2感染腺病毒Ad-SIRT1后于普通培养基培养,通过荧光显微镜了解腺病感染情况,采用Weste blot验证目的蛋白是否高表达;在不同时间点,通过Weste blot、阿尔新蓝染色、碱性磷酸酶染色检测干细胞成骨、成软骨分化关键转录调控因子及相关分化标志物的表达情况;使用XAV-939抑制β-catenin信号后,再利用Weste blot检测成骨、成软骨分化标志物表达情况.结果 C3H10T1/2感染腺病毒Ad-SIRT1后,SIRT1获得高表达;在诱导分化后第5、7、9天,Ad-SIRT1组成软骨分化的标志物Ⅱ型胶原、蛋白多糖,以及成骨分化的标志物I型胶原、骨钙素较Ad-GFP组明显增加(P＜0.05);阿尔新蓝染色结果发现Ad-SIRT1组软骨细胞外基质分泌较Ad-GFP组明显增加;碱性磷酸酶染色结果发现Ad-SIRT1组部分细胞着色为阳性,而Ad-GFP组无明显着色的细胞;同时发现诱导分化后的第3、5天,Ad-SIRT1组中成软骨、成骨分化关键转录调控因子Sox9、Runx2的表达较Ad-GFP组明显增加(P＜0.05);Ad-SIRT1组与Ad-GFP组比较,β-catenin乙酰化水平明显降低(P＜0.05),而抑制β-catenin信号后,与Ad-SIRT1组比较,Ad-SIRT1 +XAV-939组干细胞成软骨及成骨分化标志物表达明显降低(P＜0.05).结论 SIRT1能够通过β-catenin信号促进干细胞的成软骨及成骨分化.
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