巢式PCR联合焦磷酸测序检测乙肝病毒耐药基因的方法建立和初步临床应用

来源 :中西医结合肝病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:llt009
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目的:建立用巢式PCR联合焦磷酸测序技术检测HBV核苷类似物耐药基因的检测方法。方法:针对HBV P基因RT区的8个耐药位点,在其上下游分别设计两对特异性引物,构建巢式PCR扩增体系。并初步运用该方法结合焦磷酸测序对223例慢性乙型肝炎(CHB)患者进行8个耐药位点的检测和HBV基因分型。结果:本研究所建立的巢式PCR联合焦磷酸测序检测技术的最低检测下限为2×103copies/ml,在对临床样本的检测中,所有样本均能扩增出阳性条带。192例使用核苷类似物(用药组)CHB患者中,153例(79.7%)为B型HBV,39例(20.3%)为C型HBV。53例(27.6%)产生耐药突变,其中30.1%(16例)发生204位点突变,发生180位点、181位点突变的均为5.6%(3/53),3.8%(2/53)发生236位点突变,1.9%(1/53)发生202位点突变;37.7(20/53)同时发生180/204位点突变,同时发生181/236、204/250位点突变的均为3.8%(2/53);同时发生3个位点突变的占7.5%(173/180/240、180/181/204、180/184/204、180/202/204各1例)。未用药组31例CHB患者中25例(80.6%)为B型HBV,6例(19.4%)为C型HBV,未发现耐药突变的现象。结论:本检测方法能同时对HBV进行基因分型和多个耐药突变位点进行检测,对抗病毒药物的选用和疗效判断有重要的指导意义,适于临床推广使用。
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