交叉保护性抗LPS多克隆抗体的制备与LPS多表位模拟肽的筛选

来源 :中华微生物学和免疫学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hukai001
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目的获得具交叉保护性的抗细菌脂多糖(LPS)多克隆抗体与模拟LPS多表位的噬菌体展示环肽克隆. 方法制备具交叉反应性的兔抗鼠伤寒沙门菌抗血清,鉴定抗血清对大肠杆菌和铜绿假单胞菌攻击小鼠的交叉保护性.以亲和纯化的多克隆抗体为靶,亲和筛选噬菌体随机环七肽库.双夹心ELISA和竞争抑制ELISA鉴定阳性噬菌体克隆. 结果兔抗血清能与多种来源的LPS反应,对用大肠杆菌和铜绿假单胞菌攻击的小鼠有显著的保护性.用亲和层析纯化的多克隆抗体为靶分子进行3轮筛选,随机挑选46个克隆,其中20个克隆显示与多抗结合.鼠伤寒沙门菌LPS可抑制阳性噬菌体克隆与多抗结合,所有克隆的IC50(达到50%抑制率的LPS浓度)为125ng/ml.挑选其中10个克隆测序并推导氨基酸序列,其中5个克隆具X-QFYP-X-A保守序列;3个克隆具LFTFAHY序列;2个克隆具YQYYPAA序列,所有序列非极性氨基酸含量平均值为80.0%. 结论获得能与多种LPS反应且具交叉保护作用的兔多克隆抗体,筛选得到可模拟鼠伤寒沙门菌LPS多表位噬菌体展示环七肽.

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