【摘 要】
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为构建柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2(Eimeria tenella silent information regulator 2,EtSIR2)的真核表达质粒,以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA为模板,PCR扩增出EtSIR
【机 构】
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云南农业大学动物科学技术学院,中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室
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为构建柔嫩艾美耳球虫沉默信息调节因子2(Eimeria tenella silent information regulator 2,EtSIR2)的真核表达质粒,以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子cDNA为模板,PCR扩增出EtSIR2基因,PCR产物经酶切回收纯化目的片段后与经相应酶切的真核表达载体pC AGG s连接.连接产物经PCR和酶切鉴定,再经测序鉴定正确后,分别转染DF-1细胞和BHK细胞进行表达,用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtSIR2基因的表达情况.结果表明:成功扩增了EtSIR2基因,长度为909 bp;Western blot可见大小约为37 kDa的表达蛋白条带;间接免疫荧光可以检测到特异性绿色荧光,表明成功构建了EtSIR2的真核表达质粒pCAGGs-EtSIR2,并能在哺乳动物细胞和禽类细胞中表达.该研究结果为深入研究EtSIR2的生物学特性和球虫DNA疫苗的研制打下了基础.
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