目的:通过对比不同消化时间对成纤维细胞原代培养的影响,探索一种更为简便、可靠的实验方法,为原代心肌成纤维细胞的基础研究提供依据。方法:使用Ⅱ型胶原酶多次消化法,采用两种不同的消化时间对乳鼠心肌组织进行消化,利用差速贴壁法分离心肌细胞及心肌成纤维细胞,37℃孵育,使用台盼兰染色、免疫组化、3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5-dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide,MTT]等方法分析其形态、纯度、增殖能力。结果:消化时间8 min组的细胞总存活率为(94.7±0.6)%,10 min组为(93.9±0.8)%,二者比较差异无统计学意义(P>0.05);心肌成纤维细胞存活率8 min组为(55.3±9.0)%,10 min组为(91.8±5.5)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);波形蛋白免疫组化,两组阳性细胞率均>95%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);增殖能力8min组为(5.33±0.80),10 min组为(61.15±5.20),两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:两种消化时间获得的心肌成纤维细胞在形态上、纯度上无明显差异,在增殖能力和心肌成纤维细胞数量上,10 min组优于8min组。