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目的
建立和筛选慢性HIV感染者体内HIV-1型负向调节因子(Nef)多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆。
方法采集5例无症状期HIV感染者PBMC，Bulk培养，用Nef蛋白C末端的Nef末端多肽刺激，双荧光流式细胞术分析细胞表面CD4分子和细胞内γ干扰素表达。有限稀释法进行Nef末端多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆，酶联免疫斑点法(ELISPOT)筛选特异性克隆，挑选生长最好的细胞扩大培养，完成克隆。
结果1例HIV感染者的PBMC中存在特异性CD4＋T淋巴细胞，成功建立T淋巴细胞克隆。经ELISPOT法确认为Nef末端多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆。人白细胞抗原(HLA)-DRB1分型检测，提示该多肽表位可能为HLA-DRB1*0406限制性。
结论成功建立Nef末端多肽特异性CD4＋T淋巴细胞克隆，发现并鉴定了Nef末端表位及其HLA限制性。