为提高L-苯乳酸 （L-phenyllactic acid，L-PLA） 的生产效率，以干酪乳杆菌Lactobacillus casei L-乳酸脱氢酶突变体L-LcLDH1^Q88A/I229A为研究对象，实现其在毕赤酵母Pichia pastoris GS115中的分泌表达，并与葡萄糖脱氢酶SyGDH偶联，构建并优化体外辅酶循环体系，不对称还原苯丙酮酸 （Phenylpyruvate，PPA） 制备L-PLA。结果显示，毕赤酵母重组酶reLcLDH1^Q88A/I229A的表观分子量为36.8 kDa，比活力为270.5 U/mg，是原酶的42.9倍。在40 ℃，初始pH为5.0，底物PPA、辅酶NAD⁺和葡萄糖浓度分别为100、2和120 mmol/L，SyGDH和reLcLDH1^Q88A/I229A添加量分别为1和10 U/mL的最优条件下，L-PLA的产率可达99.8%，对映体过量 （ee） 值>99.9%，时空产率和平均转化率分别高达9.5 g/（L·h） 和257.0 g/（g·h）。结果表明，reLcLDH1^Q88A/I229A在不对称还原PPA制备L-PLA中生产效率高，具有工业应用的潜力。