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目的
研究Notch信号通路在普萘洛尔抑制婴幼儿血管瘤周细胞中的作用,进一步探讨普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤的机制。
方法通过手术获取增生期血管瘤标本5例,酶解法和筛分法制成细胞悬液,以流式细胞仪分选出a-SMA阳性血管瘤周细胞传代培养,第4代细胞用于实验。加入不同浓度普萘洛尔(0、10、20、40、80、160、320 μmol/L)溶液,培养24、48及72 h后,分别加入CCK-8培养液和BrdU标记液,以酶标仪检测490 nm处吸光度,判定细胞活性和增殖情况;Real-time PCR检测普萘洛尔干预前、后血管瘤周细胞中Notch3及Hes1基因表达情况。所有数据应用SPSS 13.0进行统计分析,组内、组间多组指标比较采用单因素方差分析,组内、组间2组指标比较采用配对资料t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
结果流式细胞仪分选a-SMA阳性细胞率达98.0%。加入普萘洛尔后,随着培养时间延长,细胞活性和增殖状态受到的抑制变得明显。当普萘洛尔浓度达40 μmol/L时,细胞活性和增殖开始明显受抑制,作用72 h时尤为显著,实验组细胞活性(0.17±0.05)与对照组(0.53±0.03)采用配对资料t检验进行比较,差异有统计学意义(t=3.502,P<0.05),实验组细胞增殖(301.66±28.71)与对照组(498.66±56.09)比较差异有统计学意义(t=7.425,P<0.05);Notch3及Hes1表达量随着普萘洛尔浓度的增加逐渐增多。
结论普萘洛尔可能通过活化的Notch信号通路参与血管瘤周细胞的分化和调控,进而治疗婴幼儿血管瘤。