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目的 明确多重耐药肺炎克雷伯菌质粒介导的AmpC酶基因及周围序列的结构特征,阐明质粒介导AmpC酶传播机制.方法抽提接合菌的质粒,用限制性内切酶HindIII消化,酶切DNA片段的黏末端用Taq酶补平并在末端加单个的脱氧腺苷(A),与pGEM-T Easy载体进行T-A克隆.在含氨苄西林和头孢西丁的平板上筛选重组菌,抽提重组质粒,酶切分析,克隆片段用步移法测序.对重组菌进行药敏试验和等电点分析.结果克隆筛选到含5.2 kb插入片段的重组质粒pT948,插入片段测序发现其含有一个ampC (blaDHA-1)基因和一个ampR调节基因.在blaDHA-1结构基因的侧翼发现一个插入序列IS26及Ⅰ类整合子的qacE△1和sulI基因.重组菌表达等电点为7.7,药敏试验显示对头孢西丁耐药,对头孢他啶的耐药性能被头孢西丁诱导.结论克隆到质粒介导的AmpC酶为DHA-1型,其相邻的插入序列IS26参与DHA-1的转移。