Livin shRNA稳定转染Hep-2细胞系的建立

来源 :中国耳鼻咽喉头颈外科 | 被引量 : 0次 | 上传用户：a734266739

【摘要】

：

目的构建靶向Livin基因干扰真核表达质粒，建立干扰质粒稳定转染的Hep-2细胞系，下调Livin基因在Hep-2细胞系中的表达。方法针对Livin基因的mRNA序列设计干扰序列，分别构建1个shRN

【作者】

：

邓文婷王双乐温国封李创伟

【机构】

：

中山大学附属汕头医院耳鼻咽喉头颈外科,广州军区广州总医院耳鼻咽喉头颈外科

【出处】

：

中国耳鼻咽喉头颈外科

【发表日期】

：

2013年11期

【关键词】

：

凋亡调节蛋白质类细胞培养的 RNA干扰 LIVIN基因 Apoptosis Regulatory Proteins Cells Cultured RNA

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目的构建靶向Livin基因干扰真核表达质粒，建立干扰质粒稳定转染的Hep-2细胞系，下调Livin基因在Hep-2细胞系中的表达。方法针对Livin基因的mRNA序列设计干扰序列，分别构建1个shRNA质粒表达载体和1个阴性对照质粒，大肠杆菌扩增、酶切及测序鉴定，用脂质体介导转染Hep-2细胞，经G418筛选出稳定转染的细胞系，用Real—timePCR和Westernblot检测Livin在mRNA和蛋白水平的抑制效果。结果经测序证实成功构建pGenesil-LivinshRNA真核表达质粒。干扰质粒稳

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