【摘 要】
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目的 观察早期骨关节炎(OA)软骨细胞中微小RNA(miRNA)-34a以及凋亡细胞的变化,并应用miRNA-34a的抑制剂锁核苷酸(LNA-miRNA-34a)观察miRNA-34a沉默对软骨细胞miRNA-34a的表达和凋亡的影响.方法 建立6周兔早期OA模型,并分别获得正常(A组)、3周(B组)和6周(C组)软骨细胞,应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫细胞化学等技术
【机 构】
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100035北京大学第四临床积水潭医院矫形骨科,第三军医医科大学附属新桥医院骨科,第三军医医科大学附属新桥医院骨科,第三军医医科大学附属新桥医院骨科,中山大学附属第一医院脊柱外科,中山大学附属第一医院
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目的 观察早期骨关节炎(OA)软骨细胞中微小RNA(miRNA)-34a以及凋亡细胞的变化,并应用miRNA-34a的抑制剂锁核苷酸(LNA-miRNA-34a)观察miRNA-34a沉默对软骨细胞miRNA-34a的表达和凋亡的影响.方法 建立6周兔早期OA模型,并分别获得正常(A组)、3周(B组)和6周(C组)软骨细胞,应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和免疫细胞化学等技术分析软骨细胞中miRNA-34a以及Ⅱ型胶原(Col2a1)、诱导型—氧化氮合酶(iNOS)的表达及其规律,同时采用原位末端转移酶标记染色法(TUNEL)观察细胞凋亡.转染LNA-miRNA-34a后再用同样方法获得上述各项结果并进行比较分析.结果 B组和C组软骨细胞中miRNA-34a的表达水平分别是A组的2.70倍和3.05倍;在转染LNA-miRNA-34a后,B组和C组miRNA-34a的表达降低了2.07倍和3.03倍.转染前,B组和C组iNOS的表达与A组比较分别增加了13.50倍和16.70倍,转染后B组和C组中iNOS表达与转染前比较分别降低了41.00％和37.00％;转染前B组和C组Col2a1的表达水平和A组比较,分别降低了46.80％和30.00％;转染后,Col2a1的表达和转染前比较,B组增加了2.00倍,而C组增加2.95倍;免疫组织化学染色结果显示,转染后B组和C组Col2a1阳性细胞增多,阳性染色增强,甲苯胺蓝和TUNEL染色显示凋亡细胞数显著减少.结论 早期OA软骨细胞miRNA-34a表达增加,LNA-miRNA-34a沉默miRNA-34a基因可以显著减少早期OA软骨细胞的凋亡。
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