【摘 要】
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研究了旨在克隆抗辐射菌Deinococcus radiodurans的lexA基因并构建其表达载体,以便进一步研究lexA基因的功能及其在辐射抗性中的作用.主要的实验步骤包括分离提取抗辐射菌基
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研究了旨在克隆抗辐射菌Deinococcus radiodurans的lexA基因并构建其表达载体,以便进一步研究lexA基因的功能及其在辐射抗性中的作用.主要的实验步骤包括分离提取抗辐射菌基因组DNA,分离出lexA基因并测定其序列,克隆于质粒载体PUC19,用电击穿孔法将重组的质粒导入大肠杆菌JM109,SDS-PAGE检测基因的表达.用定点突变技术,改变lexA基因核糖体结合位点(RBS),以增强lexA基因的表达.结果表明,lexA基因位于基因组DNA的BlnI-AscI片断中,由630个碱基对(bp)组成,编码210个氨基酸(aa),理论上推定,分子量为22.5kD,等电点为6.4.用pUC19构建的lexA基因表达载体能在大肠杆菌JM109中表达,但表达效率低,改变lexA的核糖体结合位点RBS可提高该基因表达水平,使进一步分离纯化lexA蛋白质以及深入研究该基因的作用成为可能.
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