【摘 要】
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目的将LoxP序列靶向引入小鼠Alk1基因,拟通过Cre/Lox P系统条件性敲除Alk1基因建立脑动静脉畸形小鼠模型。方法利用CRISPR/Cas9技术编辑小鼠Alk1基因:1设计和选择两个单导向R
【机 构】
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复旦大学附属华山医院麻醉科; 复旦大学附属华山医院神经外科;
【基金项目】
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上海市科学技术委员会实验动物研究领域项目(编号:13140903300);国家自然科学基金(编号:81000489)
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目的将LoxP序列靶向引入小鼠Alk1基因,拟通过Cre/Lox P系统条件性敲除Alk1基因建立脑动静脉畸形小鼠模型。方法利用CRISPR/Cas9技术编辑小鼠Alk1基因:1设计和选择两个单导向RNA(sg RNA)分别识别外显子3~4和8~9的非编码区位点;2设计带有2个Lox P序列且与靶基因同源的供体载体;3将体外合成的sg RNA,Cas9 m RNA和供体载体注射到小鼠受精卵;4受精卵经假孕小鼠代孕出生后,经PCR和测序筛选目标小鼠。结果小鼠Alk1等位基因的特定位点插入了Lox P序列。结论 CRISPR/Cas9技术能成功将Lox P序列靶向引入小鼠Alk1基因,为建立脑动静脉畸形小鼠模型创造条件。
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