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利用跨越内含子的PCR技术,从三角酵母(Trigonopsis variabilis)中扩增得到D-氨基酸氧化酶基因CDAAO),通过TA克隆的方法将其克隆至pBS-T载体,并转化大肠杆菌TOP10。序列测定结果表明,所得DAAO基因的5’端内含子已被删除,基因总长度为1071bp。之后将该基因与酵母表达载体pPIC3.5K连接,转化巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)。