初步筛查强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者血清中差异性表达的长链非编码核糖核酸(long noncoding RNA,lncRNA),为AS早期诊断及药物靶向治疗提供潜在新型分子标志物。
方法收集2017年1月至9月于南京鼓楼医院脊柱外科就诊的AS患者及同时段体检的健康对照血清样本各19例,AS组及对照组年龄分别为(38.74±7.42)岁和(37.00±6.86)岁。选取年龄相近的男性AS患者及健康对照血清样本各3例行高通量lncRNA测序,并根据表达差异的P值及倍数大小从测序结果中筛选出待验证的lncRNA。于AS组及对照组剩余各16例中利用TRizol试剂快速提取法提取RNA,逆转录为cDNA后针对待验证lncRNA行RT-qPCR验证测序所得结果。
结果高通量lncRNA测序发现AS组与对照组血清中差异性表达的lncRNA共43个,其中41个表达上调,2个表达下调。根据表达差异的P值排序后,从测序结果选取差异倍数>2的lncRNA作为待验证的目标基因,共4个:ENST00000365494.1(P=2.62×10-277,2.05倍);ENST00000364938.1(P=2.49×10-77,2.19倍);ENST00000363046.1(P=2.67×10-29,2.51倍);ENST00000384756.1(P=6.17×10-21,2.28倍)。RT-qPCR结果示:ENST00000365494.1的相对表达量为1.80±0.22(P=0.304),ENST00000364938.1的相对表达量为0.78±0.07(P=0.417),ENST00000363046.1的相对表达量为1.28±0.24(P=0.793),ENST00000384756.1的相对表达量为1.52±0.25(P=0.611)。其中3个lncRNA呈上调趋势,符合测序所得结果,但其相对表达量的差异均未达统计学意义。
结论验证测序所得AS患者血清中lncRNA的表达差异阴性结果,提示差异性表达的lncRNA可能未存在于外周血中,未来相关研究可偏向于病灶组织中差异性表达lncRNA的鉴定与功能探究。