【摘 要】
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目的 比较原核和真核2种表达系统重组表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶方法的优劣和目的产物的血清免疫学检测效果.方法 根据已知的华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶序列分别设计引物扩
【机 构】
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江苏省寄生虫病防治研究所、卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室、江苏省寄生虫分子生物学重点实验室、江苏省寄生虫病学重点学科 无锡214064
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目的 比较原核和真核2种表达系统重组表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶方法的优劣和目的产物的血清免疫学检测效果.方法 根据已知的华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶序列分别设计引物扩增目的基因,与相应的表达载体相连分别构建原核表达质粒pET28a-CP和真核表达质粒pPIC9K-CP,双酶切及测序鉴定后,将正确的重组质粒分别转入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)和毕赤酵母GS115中诱导表达、纯化；将获得的纯化蛋白采用ELISA方法检测华支睾吸虫病人血清和正常人血清,比较诊断效果.结果 原核表达系统表达的华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶以包涵体形式存在,表达量为6.84mg/L;真核表达系统表达量达到65.00mg/L,且为可溶性蛋白；两者检测华支睾吸虫病的敏感性分别为95.00％ (57/60)和93.30％ (56/60),特异性分别为91.67％(77/84)和94.10％(79/84),差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 真核表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶较原核表达系统具有更高的应用价值.
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