脉络膜新生血管(CNV)是多种眼部疾病致盲的原因之一，研究发现补体系统在CNV的发病机制中起重要作用。
目的构建针对补体因子B(CFB)的小干扰RNA(siRNA)重组质粒，体外观察其对人脐静脉内皮细胞ECV-304增生的影响。
方法根据人CFB的基因序列设计引物，经PCR扩增后与质粒pRNAT-U6. 1连接，得到重组质粒pRNAT-U6. 1/CFB siRNA，并进行测序鉴定和PCR鉴定。ECV-304细胞株进行常规培养，用电转染技术将重组质粒或空质粒分别转染人ECV-304细胞株，分为CFB-siRNA转染组和空质粒转染组，未转染的细胞为空白对照组。细胞转染后继续培养48 h，于倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达并计算转染效率；采用半定量逆转录PCR(RT-PCR)法测定各组细胞中CFB mRNA的相对表达量；用MTT法检测各组细胞转染24、48和72 h时细胞的增生值(A)并计算生长抑制率；利用流式细胞技术检测各组细胞的生长周期变化。
结果PCR扩增的目的片段序列与CFB基因序列完全相符，ECV-304细胞转染后，倒置荧光显微镜下可见CFB-siRNA转染组和空质粒转染组的细胞中GFP呈绿色荧光。半定量RT-PCR结果显示，CFB-siRNA转染组、空质粒转染组和空白对照组的CFB mRNA相对表达量分别为0. 07±0. 04、0. 14±0. 02和0. 14±0. 03，总体比较差异有统计学意义(F＝233. 05，P＝0. 00)；其中CFB-siRNA转染组CFB mRNA相对表达量明显低于空质粒转染组和空白对照组，差异均有统计学意义(均P<0. 05)。MTT法检测结果显示，各组不同时间细胞增生抑制率总体比较差异有统计学意义(F分组＝212. 99，P＝0. 00)；CFB-siRNA转染组细胞转染24、48、72 h后细胞增生的抑制率分别为(23. 45±0. 01)%、(33. 48±0. 02)%和(45. 49±0. 01)%，明显高于同时间点空质粒转染组和空白对照组，差异均有统计学意义(均P<0. 05)。流式细胞仪检测结果显示，CFB-siRNA转染组、空质粒转染组和空白对照组G1期的细胞数占总细胞数的(44. 4±0. 5)%、(25. 8±0. 4)%和(27. 9±0. 6)%，总体比较差异有统计学意义(F＝58. 98，P＝0. 00)；CFB-siRNA转染组G1期和G2期细胞所占百分比显著高于空白对照组和空质粒转染组，差异均有统计学意义(均P<0. 05)。
结论重组质粒pRNAT-U6. 1/CFB siRNA可通过将细胞阻滞在G1期而有效抑制人脐静脉内皮细胞的增生。