【摘 要】
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为解决刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)高密度深层培养过程中的供氧不足问题,促进多杀菌素的生物合成,采用重叠PCR技术将透明颤菌(Vitreoscillastercoraria)血红蛋白
【机 构】
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湖南师范大学生命科学学院微生物分子生物学国家重点实验室培育基地;
【基金项目】
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国家重点基础研究发展计划(批准号:2012CB722301,2011CB111605);国家高技术研究发展计划(批准号:2011AA10A203);国家自然科学基金(批准号:31070006)资助项目
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为解决刺糖多孢菌(Saccharopolyspora spinosa)高密度深层培养过程中的供氧不足问题,促进多杀菌素的生物合成,采用重叠PCR技术将透明颤菌(Vitreoscillastercoraria)血红蛋白基因(vgb)可读框(ORF)置于红霉素抗性基因启动子(PermE)之下,并将其克隆到整合型载体pSET152上,构建成vgb表达载体pSET152EVHB;通过接合转移方式将其导入刺糖多孢菌SP06081中,利用载体上ΦC31整合性位点通过位点特异性重组将vgb定点整合到SP06081菌株染色体上,获得一株遗传性能稳定的重组菌株S078-1101;重组工程菌的PCR与Southern blotting检测显示vgb已整合到染色体上,一氧化碳结合差光谱分析表明在S078-1101工程菌中表达了有活性的透明颤菌血红蛋白(VHb);摇瓶发酵结果显示,在正常溶氧与中度限氧状态下,vgb的表达均可显著促进多杀菌素的生物合成(P<0.01).这说明vgb在刺糖多孢菌中的整合表达改善了菌体对溶氧的吸收性能,是一种有效的定向遗传改良手段.
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