【摘 要】
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目的 探讨星形胶质细胞缺氧复氧损伤后细胞周期蛋白D1( Cyclin D1)的表达以及亚低温干预对其的影响.方法 原代培养取材于新生SD大鼠皮层脑组织的星形胶质细胞(astrocytes,AC)
【机 构】
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徐州医学院附属医院神经内科,徐州空军学院门诊部
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目的 探讨星形胶质细胞缺氧复氧损伤后细胞周期蛋白D1( Cyclin D1)的表达以及亚低温干预对其的影响.方法 原代培养取材于新生SD大鼠皮层脑组织的星形胶质细胞(astrocytes,AC),传至第3代自然纯化后采用神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)化学染色法对其进行鉴定,并将其分为正常(37℃)对照组(C)、常温(37℃)缺氧复氧组(H/R)、亚低温(32℃)干预缺氧复氧组(M+H/R).以95％ N2和5％ CO2的培养条件致细胞缺氧8h,其后恢复正常供氧,分别复氧4,12,20h等,建立缺氧复氧模型.观察各时点AC的形态学变化、台盼蓝染色法测定AC的存活率、细胞免疫荧光及Western-blot检测Cyclin D1的表达变化.结果 1.自然纯化后的第3代AC 95％以上呈GFAP阳性；2.缺氧8h后,常温组及亚低温组AC的形态和存活力变化均不明显,但随着复氧时间延长,两组细胞死亡数均显著增高(按复氧时间常温组分别为:12.87 ±2.76、31.55 ±3.00、46.40±8.50；低温组分别为:6.77 ±1.53、15.97 ±4.00、28.33±5.69),但亚低温组AC较常温组AC损伤明显减轻(P＜0.05),细胞存活力增强.3.免疫荧光和Western-blot检测示AC正常氧供时Cyclin D1表达无明显变化,缺氧8h后两组AC的Cyclin D1表达均增加,且随复氧时间延长呈明显增高趋势,亚低温组Cyclin D1的免疫表达较常温组显著减少.结论 Cyclin D1是星形胶质细胞缺氧复氧损伤的敏感指标,通过抑制Cyclin D1表达调控细胞周期可能是亚低温脑保护的作用机制之一.
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