【摘 要】
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目的构建在哺乳动物细胞中表达的septin 8红色荧光蛋白融合表达载体(pmCherry-C2/septin 8),并观察其在细胞内的表达和定位情况。方法采用PCR的方法从人脑胶质细胞瘤cDNA文库
【机 构】
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南方医科大学病理生理学教研室广东省蛋白质组学重点实验室;
【基金项目】
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长江学者和创新团队发展计划项目(No.IRT0731);国家自然科学基金委员会-广东省人民政府自然科学联合基金重点项目(No.U0632004);国家自然科学基金(No.30670828,30572151)
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目的构建在哺乳动物细胞中表达的septin 8红色荧光蛋白融合表达载体(pmCherry-C2/septin 8),并观察其在细胞内的表达和定位情况。方法采用PCR的方法从人脑胶质细胞瘤cDNA文库中扩增获得septin 8基因编码区序列,将其克隆至红色荧光蛋白载体pmCherry-C2上,重组质粒经PCR、酶切以及序列分析正确无误后转染NIH3T3细胞,并利用Western blotting和细胞免疫化学技术分析重组蛋白在细胞内的表达和定位。结果重组pmCherry-C2/septin 8融合蛋白在NIH3T3细胞中得到高量表达且主要分布于细胞浆。结论成功构建了pmCherry-C2/septin 8融合表达载体,该载体能在哺乳动物细胞NIH3T3中表达,为进一步研究septin 8细胞内生物学功能打下了良好的基础。
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