【摘 要】
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AFLP是目前最常用的几种标记之一.本文以甘薯为材料,通过DNA提取、酶切、PCR扩增、凝胶电泳等系列程序摸索和优化,建立了甘薯的AFLP分子标记体系.优化的甘薯AFLP分子标记体系
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AFLP是目前最常用的几种标记之一.本文以甘薯为材料,通过DNA提取、酶切、PCR扩增、凝胶电泳等系列程序摸索和优化,建立了甘薯的AFLP分子标记体系.优化的甘薯AFLP分子标记体系的程序如下:将4μl 100ng/μl的甘薯DNA用EcoR Ⅰ酶、Mse Ⅰ酶各5U进行双酶切,在37℃下酶切3h后再在65℃下酶切3h;然后加入10μl连接混合液在22℃下连接3h后在16℃下连接10h;取连接产物5μl,10μmol/LEcoR Ⅰ预扩引物和10μmol/L Mse Ⅰ预扩引物各1.5μl,PCR缓冲液25μl,ddH2O 17μl进行预扩增;取5μl稀释20倍后的预扩增产物,50ng/μl EcoR Ⅰ选扩引物和50ng/μl Mse Ⅰ选扩引物各1μl,PCR缓冲液10μl,ddH2O 3μl,进行选择性扩增.本研究为甘薯黑斑病和其他真菌性病害的分子标记克隆及抗病育种的辅助选择提供了有力工具.
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