热刺激后小鼠皮肤角质形成细胞表面柯萨奇一腺病毒受体表达及该受体对树突状表皮T淋巴细胞的作用

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目的了解热刺激对小鼠皮肤KC表面柯萨奇-腺病毒受体(CAR)表达的影响及CAR对树突状表皮T淋巴细胞(DETC)分泌细胞生长因子的作用、,方法(1)取20只BALB/c小鼠,按随机数字表法分为热刺激组和对照组,每组10只。热刺激组小鼠用经100℃热水浸泡约3rain后拧千的湿纱布作用于背部脱毛区l~3s造成不超过I度烫伤的损伤;对照组小鼠川经室温水浸泡后拧f:的湿纱布作用于背部脱毛区l~3S致似伤。留取脱毛J)(中央2.0c-X2.0cn,方形全层皮肤,免疫组织化学染色法观察皮肤组织切片巾CAR的表达,实时荧光定量RT—PCR、蛋白质印迹法分刖测定小鼠皮肤组织r11CAR的mRNA和蛋rI表达水平、(2)取2只BALB/c胎鼠,切取躯f全层皮肤,分离培养KC,按随机数字表法分为热刺激组和对照组,每组设5个复孔,对照组置于常规培养箱中培养1h,热刺激组置于42℃、体积分数5%二氧化碳培养箱巾培养lh,随后均于常规环境中继续培养6h,用流式细胞仪检测KC的凋r二率千¨CAR的表达。(3)取5只BALB/c小鼠断颈处死,切取躯干全层皮肤,分离培养捉纯小鼠DETC,按随机数字表法分为7组,对照组不加任何刺激闪素,0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mg/I.CAR组培养液111添加相应浓度的重组鼠CAR,每组设5个复孔,川EI。ISA法测定胰岛素样生长闪子I(IGF-I)、角质形成细胞生长因子(KGF)浓度。对数据行独立样本t检验和单『太l素方差分析。结果(1)免疫组织化学染色显示对照组小鼠皮肤组织切片有轻度阳性染色,热刺激组小鼠皮肤组织切片阳性染色明显加深,均主要集中在表皮KC、毛囊、汗腺k皮细胞上,FI,未见阳性染色。对照组和热刺激组小鼠皮肤组织中CAR的mRNA表达水平分别为0.157±0.027和0.773±0.029,二者比较差异有统计学意义(f:3.052,P〈0.01);CAR的蛋白表达水平分别为0.23±0.09和0.89±0.14,二者比较差异有统计学意义(t:2.556,P〈0.05)。。(2)对照组和热刺激组小鼠KC凋广率分别为(5.7±1.3)%和(7.4±1.7)%,二者比较差异无统计学意义(£=0.464,P〉0.05);KC表丽CAR的表达率分别为(48±6)%和(80±8)%,二者比较差异有统计学意义(t:2.585,P〈0.05)。、(3)对照组DETC培养上清液叶1IGF—I浓度为(23.1±1.8)斗g/L,0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0mg/I。CAR组DETC培养k清液中IGF—I浓度分别为(22.5±2.1)、(31.2±2.5)、(39.7±2.3)、(61.8±3.5)、(45.1±2.8)、(29.0±2.0)tLg/L,组间总体比较差异有统计学意义(F:3.414,P〈0.05)。对照组DETC培养上清液中KGF浓度为(131±9)ng/I.-,0.5、I.0、2.0、4.0、8.0、16.0mg/L.CAR纰KGF浓度分别为(217±12)、(355±21)、(5634-21)、(535±34)、(292±20)、(245±10)ng/I。,组问总体比较差异何统计学意义(F=5.063,P〈0.01)。结论热刺激后小鼠皮肤KC表面CAR表达上调,且CAR促进DETC分泌IGF-I、KGF的最佳浓度较低。

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