【摘 要】
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目的 探索去泛素化酶含OTU结构域蛋白3（OTUD3）在乳腺癌中对抑癌蛋白PTEN肿瘤相关突变体蛋白稳定性的调控。方法 收集50例乳腺癌病人样本，提取癌与癌旁组织的RNA后进行逆转录，对PTEN C2结构域进行PCR扩增后测序分析，鉴定乳腺癌PTEN C2结构域的肿瘤相关突变。结合现有数据库中PTEN基因的突变位点信息，将PTEN突变体的编码序列扩增后插入哺乳动物表达载体pCMV-Myc中，构建含
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院生命组学研究所蛋白质组学国家重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金重点项目（31330021）；
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目的 探索去泛素化酶含OTU结构域蛋白3（OTUD3）在乳腺癌中对抑癌蛋白PTEN肿瘤相关突变体蛋白稳定性的调控。方法 收集50例乳腺癌病人样本，提取癌与癌旁组织的RNA后进行逆转录，对PTEN C2结构域进行PCR扩增后测序分析，鉴定乳腺癌PTEN C2结构域的肿瘤相关突变。结合现有数据库中PTEN基因的突变位点信息，将PTEN突变体的编码序列扩增后插入哺乳动物表达载体pCMV-Myc中，构建含有PTEN C2结构域肿瘤相关突变体基因的质粒载体。将上述含PTEN点突变体或截短体基因的质粒载体分别与含OTUD3基因的质粒载体共转染MCF-7细胞，通过免疫共沉淀实验、半衰期实验、泛素化实验及Western印迹实验分别检测PTEN所有突变体与OTUD3结合能力、OTUD3对部分PTEN突变体蛋白稳定性的维持能力及去泛素化修饰能力。结果 从50例乳腺癌病例中鉴定出PTEN C2结构域有3种突变，即I224M、E307K与F341V，其中F341V是本研究在乳腺癌病例中首次鉴定出的PTEN突变体。△M199、F341V以及1-319丧失了与OTUD3结合的能力，从而失去了OTUD3对其的稳定作用。结论 在乳腺癌中，PTEN的一些突变体丧失了与OTUD3结合的能力，不能对其去泛素化修饰，使得蛋白稳定性降低。
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