【摘 要】
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制备丙型肝炎病毒(HCV)1b亚型诊断芯片并进行初步验证评价.采用cDNA文库法制备探针,用限制性内切酶Sau3AⅠ消化HCV-1b全长cDNA,所得的酶切片段72℃补平加A,AT克隆,PCR初步鉴
【机 构】
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孙朝晖,广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所
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制备丙型肝炎病毒(HCV)1b亚型诊断芯片并进行初步验证评价.采用cDNA文库法制备探针,用限制性内切酶Sau3AⅠ消化HCV-1b全长cDNA,所得的酶切片段72℃补平加A,AT克隆,PCR初步鉴定,并测序.将筛选出的片段打印在氨基修饰的玻片上制备成检测芯片并进行杂交验证分析.运用cDNA文库法,得到22个大小相对一致(250～750 bp)的基因片段.序列分析表明,均属于HCV-1b基因,可以作为诊断芯片探针;样品标记采用限制性显示(restriction display,RD)技术,标记后进行杂交.杂交结果显示,样品和诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳.批内和批间精密度CV值分别为5.4%和6.8%,表明用cDNA文库法收集片段是一种快速、简便制备芯片探针的实用方法.
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