【摘 要】
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为建立一种H7N9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的快速检测方法,本研究据H7亚型AIV HA基因、N9亚型AIV NA基因和所有亚型AIV M基因的保守序列,分别设计了3对特异
【机 构】
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广西壮族自治区兽医研究所、广西畜禽疫苗新技术重点实验室
【基金项目】
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广西特聘专家专项(2011B020);广西科技攻关重大专项(桂科重1222003-2-4);广西科技攻关(1010014-5)
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为建立一种H7N9亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的快速检测方法,本研究据H7亚型AIV HA基因、N9亚型AIV NA基因和所有亚型AIV M基因的保守序列,分别设计了3对特异性引物,通过优化反应条件、特异性和敏感性试验,建立了H7N9亚型AIV三重PCR检测方法。该法对H7N9亚型AIV进行扩增,分别得到330(H7亚型AIV)、207(N9亚型AIV)和632bp(AIV)的3条特异性条带;含有H7或N9亚型AIV的模板均出现2条特异性条带,大小分别为330和632、207和632bp;含有其他亚型AIV的模板只出现1条特异性条带,大小为632bp,对其他禽病病原体的检测均无条带。敏感性试验结果表明,该法最低能检测到103拷贝/μL H7N9亚型AIV。本研究建立的H7N9亚型AIV三重PCR检测方法,一管检测既可确定是否为H7N9亚型AIV感染,还可确定单一H7亚型AIV、单一N9亚型AIV和其他亚型AIV感染,具有快速、特异和敏感的优点,为H7N9亚型AIV的临床检测及有效防控提供技术支持。
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