【摘 要】
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【目的】优化水牛卵泡液蛋白质差异表达样品制备程序,为相对和绝对定量同位素标签（iTRAQ）技术在蛋白质差异表达分析中的应用奠定基础。【方法】在蛋白质样品溶液酶解过程中,选
【机 构】
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亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室,广西大学
【基金项目】
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Scientific Research Fund of Guangxi Education Department（YB2014004）, The Open Topic from Guangxi Key Laboratory of Buffalo Genetics Reproduction and Breeding（SNKF-2012-05,SNKF-2013-02）
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【目的】优化水牛卵泡液蛋白质差异表达样品制备程序,为相对和绝对定量同位素标签（iTRAQ）技术在蛋白质差异表达分析中的应用奠定基础。【方法】在蛋白质样品溶液酶解过程中,选择两种不同沉淀剂沉淀蛋白质,分别比较蛋白质酶解、iTRAQ标记反应和多肽色谱分离的效果;在纳升液相色谱（nano-LC）分离样品前用快速分离小柱进行处理,鉴定色谱分离效果,以确定蛋白质样品预处理的优化程序。【结果】相对于丙酮,使用含0.1%乙酸的丙酮—乙醇混合液（1∶1）作为沉淀剂可获得较好的蛋白质沉淀效果,蛋白沉淀为白色,蛋白质浓度为5
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